[發明專利]重組人血管緊張素轉化酶2蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010107512.3
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN113292655A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 王伯初;郝石磊;慶睿;查國棟;陳海容;歐珍
• 申請（專利權）人: 海默斯（重慶）醫學生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/48;C12N15/70;A61K38/48;A61K47/64;A61K47/68;A61P31/14;A61P11/00
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.重組人血管緊張素轉化酶2蛋白，其特征在于，所述重組人血管緊張素轉化酶2蛋白可競爭性結合ACE2配體，通過對設計的全長、膜外區、穿膜區的相關氨基酸進行突變獲得親水性的ACE2全長蛋白；所述重組人血管緊張素轉化酶2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

2.根據權利要求1所述的重組人血管緊張素轉化酶2蛋白，其特征在于，所述氨基酸序列SEQ ID NO：1的結構依次由膜外區、穿膜區和FC組成；所述氨基酸序列SEQ ID NO：2的結構依次由全長和FC組成。

3.權利要求1或2所述的重組人血管緊張素轉化酶2蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

1)人工合成重組人血管緊張素轉化酶2基因；

2)重組人血管緊張素轉化酶2蛋白的表達：利用原核表達系統將重組人血管緊張素轉化酶2基因在大腸桿菌中進行表達，并獲得重組人血管緊張素轉化酶2基工程菌株，經IPTG誘導表達重組人血管緊張素轉化酶2蛋白；

3)重組人血管緊張素轉化酶2蛋白的純化：利用His標簽可溶性蛋白純化進行蛋白純化。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述重組人血管緊張素轉化酶2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟2)將重組人血管緊張素轉化酶2基因插入原核表達載體pET3C，構建重組表達質粒pET3C-ACE2，并將質粒轉化大腸桿菌BL21DE3PLYsS，獲得重組人血管緊張素轉化酶2基工程菌株，將工程菌株進行培養然后加入IPTG進行誘導表達重組人血管緊張素轉化酶2蛋白。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述表達載體pET3C含有T7啟動子。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，IPTG進行誘導的條件為37℃，200rpm轉速條件下將工程菌株培養3h至菌液的OD600達到0.50.7時加入終濃度為2mM的IPTG誘導表達4h。

8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟3)利用His標簽可溶性蛋白純化進行蛋白純化后采用Ni瓊脂糖凝膠層析柱洗脫純化。

9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含權利要求1或2所述的重組人血管緊張素轉化酶2蛋白。

10.權利要求9所述的藥物組合物在制備抗冠狀病毒藥物中的應用。