[發(fā)明專利]與OX40L非競爭結(jié)合的抗OX40抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010107498.7
• 申請(qǐng)日: 2018-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN111393529B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寧金鷹;郝鋒;賀鋒;寧明萱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 康源博創(chuàng)生物科技(北京)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;C12N15/85;G01N33/68;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京瑞恒信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11382
• 代理人: 張偉

本發(fā)明為與OX40L非競爭結(jié)合的抗OX40抗體，提供一種能夠特異性結(jié)合OX40的抗體，所述抗體與OX40配體OX40L為非競爭結(jié)合關(guān)系，因此與OX40L具有協(xié)同激活作用。此外，本發(fā)明提供編碼所述抗體的核酸序列，包含所述核酸序列的載體以及用所述載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。更進(jìn)一步地，本發(fā)明提供所述抗體的制藥用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗體藥物領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種抗OX40抗體及其用途。

背景技術(shù)

OX40是1型跨膜糖蛋白，近30年前作為一個(gè)激活的T細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞表面抗原得到報(bào)道。自發(fā)現(xiàn)以來，它被證實(shí)是T細(xì)胞和腫瘤壞死因子受體家族成員的共刺激分子，也稱為“腫瘤壞死因子受體超家族成員4”或CD134，基因的名稱為TNFRSF4。

OX40的分子量為50kD，具有胞質(zhì)尾、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞外區(qū)。目前OX40只有一個(gè)已知配體，即OX40L(CD252)，其表達(dá)在活化的APC細(xì)胞上，OX40與其配體的結(jié)合會(huì)共刺激T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。OX40對(duì)T細(xì)胞的刺激是通過胞漿內(nèi)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的，如NF-κB以及T細(xì)胞活化核因子(NFAT)的激活，后者可以提高如survivin、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶、Bcl-2抗凋亡分子、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體的表達(dá)。

OX40是長期T細(xì)胞免疫的共刺激分子，同時(shí)在CD4+T細(xì)胞應(yīng)答和T細(xì)胞依賴B細(xì)胞增殖分化中起著積極的促進(jìn)作用。發(fā)現(xiàn)OX40在小鼠T細(xì)胞表面的表達(dá)通常發(fā)生在同源抗原識(shí)別后的24小時(shí)和96小時(shí)之間。使用激活性的OX40抗體，直接促進(jìn)了不同的效應(yīng)T細(xì)胞亞群增加生存。

此外，OX40在腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)的表達(dá)已經(jīng)有了不同深入的研究，如在乳腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤、頭頸部腫瘤中。另外發(fā)現(xiàn)OX40在結(jié)腸癌腫瘤組織中高表達(dá)，在腸系膜淋巴結(jié)或在浸潤性邊緣淋巴的OX40的表達(dá)與整體生存率相關(guān)。

正是因?yàn)镺X40對(duì)T細(xì)胞具有激活作用，其涉及多種疾病，并可應(yīng)用于腫瘤免疫治療及器官移植的抗排異等多個(gè)領(lǐng)域。因此，共刺激分子OX40屬于下一代目前在腫瘤學(xué)早期臨床試驗(yàn)中檢測(cè)的免疫治療靶點(diǎn)。

目前國內(nèi)外已有一些公司或者機(jī)構(gòu)針對(duì)OX40開始了一些研究，包括開發(fā)針對(duì)該靶點(diǎn)的激動(dòng)劑，例如小分子及生物大分子抗體的藥物開發(fā)。幾種OX40單克隆抗體目前正在進(jìn)行早期癌癥臨床試驗(yàn)。但是，目前的數(shù)據(jù)顯示，此類激動(dòng)劑大都和OX40L有對(duì)OX40結(jié)合的競爭關(guān)系，因此在此類激動(dòng)劑激活OX40的同時(shí)也失去了天然配體對(duì)OX40的激活作用。例如，國際上現(xiàn)有的OX40抗體大都與OX40L競爭性結(jié)合OX40，即抗體與OX40的結(jié)合位點(diǎn)和OX40L與OX40的結(jié)合位點(diǎn)有部分重合，所以當(dāng)抗體作為激動(dòng)劑激活了OX40及其下游信號(hào)通路時(shí)，卻失去了OX40L作為天然配體也同時(shí)激活OX40的功能。

因此，本領(lǐng)域仍然存在對(duì)新型抗OX40抗體的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供一種新型抗OX40抗體，所述抗體對(duì)OX40具有高親和力，能有效激活OX40蛋白及其下游的信號(hào)通路，同時(shí)所述抗體與OX40配體OX40L為非競爭結(jié)合關(guān)系，因此與OX40L具有協(xié)同激活作用，從而克服現(xiàn)有抗OX40抗體的不足。

針對(duì)上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種新型抗OX40抗體或其功能性片段，并基于該新型OX40抗體或片段，提供其用途。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的發(fā)明人以O(shè)X40蛋白的胞外區(qū)與小鼠IgG2a FC標(biāo)簽構(gòu)建的融合蛋白作為免疫原，免疫小鼠，利用雜交瘤技術(shù)，篩選在分子水平和細(xì)胞水平上與OX40親和力最好的雜交瘤細(xì)胞株，利用HT1080-OX40穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞在親和力高的細(xì)胞株里采用ELISA方法篩選激活功能最好的雜交瘤細(xì)胞株并測(cè)定抗體序列。