[發(fā)明專利]一種硒單糖的酶催化檢出方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010106879.3
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號(hào): CN111198185B
• 公開（公告）日: 2023-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧盛元;王麗娟;黃潔;吳希;郭睿;李臻怡;宋美燕;王健;郭仁妹
• 申請（專利權(quán)）人: 邁科若（蘇州）醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 李柏柏

1.細(xì)胞色素P450單加氧酶、鐵氧化還原蛋白、鐵氧還蛋白還原酶和還原型四甲基聯(lián)苯胺在檢測硒單糖或制備硒單糖檢出試劑中的應(yīng)用，所述硒單糖為1β-甲基硒-2-N-乙酰基-D-半乳糖胺。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述細(xì)胞色素P450單加氧酶由大腸桿菌(Escherichia coli)重組表達(dá)，源于NCBI序列號(hào)為WP_038530297.1的細(xì)菌Formosaagariphila，細(xì)胞色素P450單加氧酶代號(hào)為CYP236A20。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述CYP236A20、鐵氧化還原蛋白、鐵氧還蛋白還原酶和還原型四甲基聯(lián)苯胺的濃度比為0.01～1.0:1.0～90.0:0.2～18.0:250～3000。

4.一種硒單糖的酶催化檢出方法，所述硒單糖為1β-甲基硒-2-N-乙酰基-D-半乳糖胺，其特征在于，包括以下步驟：

提供含有細(xì)胞色素P450單加氧酶、鐵氧化還原蛋白和鐵氧還蛋白還原酶的待測溶液；

向待測溶液中加入還原型四甲基聯(lián)苯胺溶液，根據(jù)待測溶液的顏色變化判斷待測溶液中是否含有所述硒單糖。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢出方法，其特征在于：所述含有細(xì)胞色素P450單加氧酶來源于細(xì)菌Formosa agariphila，細(xì)菌Formosa agariphila的NCBI序列號(hào)為WP_038530297.1，代號(hào)CYP236A20；所述待測溶液中CYP236A20的濃度為0.01～1.0μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢出方法，其特征在于：所述待測溶液中鐵氧化還原蛋白的濃度為1.0～90.0μM。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢出方法，其特征在于：所述待測溶液中鐵氧還蛋白還原酶的濃度為0.2～18.0μM。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢出方法，其特征在于：所述待測溶液中還原型四甲基聯(lián)苯胺的濃度為0.25～3.0mM。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢出方法，其特征在于：所述待測溶液的pH值為7.0～8.0。

10.一種1β-甲基硒-2-N-乙酰基-D-半乳糖胺的指示劑，其特征在于，包括細(xì)胞色素P450單加氧酶、鐵氧化還原蛋白、鐵氧還蛋白還原酶和還原型四甲基聯(lián)苯胺。