[發明專利]鑒別觸珠蛋白表型的成套設備及方法

在審

• 申請號: 202010106010.9
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111398596A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 馬雪婷;李運濤;周曉光
• 申請（專利權）人: 融智生物科技（青島）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.MALDI-TOF質譜儀在鑒別觸珠蛋白表型中的應用。

2.鑒別觸珠蛋白表型的成套設備，其特征在于：所述成套設備包括MALDI-TOF質譜儀、MALDI-TOF質譜檢測用試劑和可讀載體；

所述可讀載體記載如下：

若還原后的待測樣品經MALDI-TOF質譜儀檢測得到的蛋白質譜圖中出現質荷比9180～9200的峰，沒有出現質荷比15935～15955的峰，則待測樣品的觸珠蛋白表型被鑒別為Hp1-1型；若還原后的待測樣品經MALDI-TOF質譜儀檢測得到的蛋白質譜圖中出現質荷比15935～15955的峰，沒有出現質荷比9180～9200的峰則待測樣品的觸珠蛋白表型被鑒別為Hp2-2型；若還原后的待測樣品經MALDI-TOF質譜儀檢測得到的蛋白質譜圖中同時出現質荷比9180～9200的峰和質荷比15935～15955的峰，則待測樣品的觸珠蛋白表型被鑒別為Hp2-1型。

3.根據權利要求2所述的成套設備，其特征在于：所述MALDI-TOF質譜檢測用試劑包括芥子酸基質。

4.根據權利要求2或3所述的成套設備，其特征在于：所述還原后的待測樣品為利用二硫蘇糖醇還原試劑對待測樣品進行還原后得到的。

5.鑒別觸珠蛋白表型的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：用MALDI-TOF質譜儀檢測還原后的待測樣品，得到還原后的待測樣品的蛋白質譜圖，根據蛋白質譜圖中出現的質荷比鑒別觸珠蛋白表型：若蛋白質譜圖中出現質荷比9180～9200的峰，沒有出現質荷比15935～15955的峰，則待測樣品的觸珠蛋白表型被鑒別為Hp1-1型；若蛋白質譜圖中出現質荷比15935～15955的峰，沒有出現質荷比9180～9200的峰，則待測樣品的觸珠蛋白表型被鑒別為Hp2-2型；若蛋白質譜圖中同時出現質荷比9180～9200的峰和質荷比15935～15955的峰，則待測樣品的觸珠蛋白表型被鑒別為Hp2-1型。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述MALDI-TOF質譜儀的設置參數如下：激光頻率為1000Hz，激光能量為5.2μJ，檢測器電壓為-0.75kV，Focus Mass為10000Da，采集質荷比范圍為5000Da-20,000Da。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述還原后的待測樣品為利用二硫蘇糖醇還原試劑對待測樣品進行還原后得到的待測樣品；優選的，所述還原為在95℃還原5min。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述待測樣品與二硫蘇糖醇還原試劑的體積比1:5～1:19，所述二硫蘇糖醇還原試劑中二硫蘇糖醇的含量為80～120mM，碳酸氫銨的含量為25mM。

9.根據權利要求5-8任一所述的方法，其特征在于：用MALDI-TOF質譜儀檢測還原后的待測樣品的方法，包括如下步驟：

將還原后的待測樣品與芥子酸基質進行混合，得到混合液；

將芥子酸基質點在MALDI-TOF質譜儀的靶板的每個孔，待芥子酸基質干燥結晶后，得到預制靶板；

將所述混合液點在所述預制靶板的每個孔上，干燥后置于MALDI-TOF質譜儀進行分析。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：所述還原后的待測樣品與芥子酸基質的體積比1:5～1:19；所述芥子酸基質中芥子酸的含量為10-20mg/mL、乙腈的體積百分含量為30-40％和乙醇的體積百分含量為10-20％。