[發(fā)明專利]檢測人阿司匹林抵抗基因多態(tài)性的組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010105511.5
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111154842B
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龍鳳英;吳康;繆為民;戴立忠
• 申請（專利權(quán)）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 董超男;張穎玲

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，更具體的，涉及人阿司匹林抵抗基因多態(tài)性檢測領(lǐng)域。提供了一種組合物，其檢測人阿司匹林抵抗基因多態(tài)性；與此同時，還提供了所述組合物用于檢測人阿司匹林抵抗基因多態(tài)性的用途、包含所述組合物的試劑盒以及用于檢測人阿司匹林抵抗基因多態(tài)性的方法，使用本發(fā)明的組合物以及方法，檢測CYP2C19基因、ITGB3基因、PEAR1基因、PTGS1基因的SNP位點，使得檢測阿司匹林抵抗的能力更加全面，且靈敏度高，檢測周期短。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，更具體的，屬于人阿司匹林抵抗基因多態(tài)性檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

阿司匹林(aspirin)是最為常見的抗血小板治療藥物。最早作為非甾體抗炎藥用于解熱鎮(zhèn)痛，現(xiàn)多用于預(yù)防血栓等疾病，是治療急性冠狀動脈綜合征和經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)后抗栓的基礎(chǔ)藥物，其作為心肌梗死、缺血性腦卒中和外周動脈閉塞性疾病的一級和二級預(yù)防用藥被廣泛應(yīng)用(廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病)。阿司匹林經(jīng)腸道吸收后很快被代謝成為活性產(chǎn)物水楊酸，隨血液分布全身。水楊酸可以與血小板內(nèi)的環(huán)氧合酶(cyclooxygenase，COX)活性部分絲氨酸殘基發(fā)生不可逆的乙酰化反應(yīng)，使酶失活，抑制花生四烯酸(arachidonic?acid，AA)的代謝，從而抑制血栓素A2(thromboxane?A2，TXA2)的生成，血栓素A2能夠誘導(dǎo)血小板使其發(fā)生聚集反應(yīng)，而血栓素生成受到抑制則可以很好地起到抗凝作用。

臨床發(fā)現(xiàn)并不是所有常規(guī)服用阿司匹林的患者都能獲得一致的抑制血小板聚集和防止血栓和栓塞事件發(fā)生的臨床療效，于是提出阿司匹林抵抗(aspirin?resistance，AR)這一概念，其發(fā)生率約5％～60％，且存在明顯種族差異性。關(guān)于阿司匹林抵抗(阿司匹林反應(yīng)低下)的遺傳易感性方面的報道有：包括細(xì)胞色素P450?2C19(CYP2C19)、COX-1、COX-2、GPIα、GPIbα、GPIIIbα、ADP受體P2RY1和P2RY12、凝血因子XIII(FXIII)基因異常與阿司匹林抵抗相關(guān)聯(lián)，然而，人種差異的存在，使這些基因不完全適合中國人群。根據(jù)相關(guān)基因與藥物劑量、療效及不良反應(yīng)的關(guān)系，以及中國人群的分布頻率，建議檢測CYP2C19、GPIIIaPLA2、PEAR1、COX-1相關(guān)基因型，以指導(dǎo)阿司匹林的精準(zhǔn)治療。

阿司匹林主要由CYP2C19代謝，CYP2C19酶活性下降會導(dǎo)致阿司匹林的血小板抑制作用減弱，主要檢測*2(rs12769205)及*17(rs12248560)(代謝、劑量療效、毒性/不良反應(yīng))。

血小板受體包括特異性結(jié)合纖維蛋白原和血管假性血友病因子的糖蛋白(GP)IIb/IIIa(ITGB3)，特異性結(jié)合ADP的P2Y受體以及與膠原結(jié)合的GPIa-IIa、GPVI和GPIb-IX-V受體。血小板膜糖蛋白IIb/IIIa復(fù)合體(GPIIb/IIIa)是纖維蛋白原的受體，它介導(dǎo)血小板的聚集，GPIIIa亞基PLA存在多態(tài)性，主要檢測ITGB3基因rs5918位點，表現(xiàn)為PLA1/A1和PLA2/A2純合型、PLA1/A2雜合型。PLA2/A2使得GPIIIb/IIIa受體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使血小板之間發(fā)生交叉連接，導(dǎo)致血小板聚集，療效較差。

表達(dá)在血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上的I型膜蛋白(PEAR1)。該受體的磷酸化可能促進(jìn)αIIbβ3信號的激活放大，使大量血小板脫顆粒，引起血小板之間不可逆的聚集反應(yīng)。主要檢測rs12041331位點，GG等位基因?qū)Π⑺酒チ謶?yīng)答好，突變基因型AA或AG的患者使用阿司匹林時的心肌梗死發(fā)生率和死亡率會增高。

環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)是前列腺素合成過程中的重要限速酶，它有兩種同工酶：COX-1和COX-2，分別由PTGS1和PTGS2基因編碼。阿司匹林是非選擇性的COX酶抑制劑，COX-1是其主要底物酶，為組織結(jié)構(gòu)酶，在多種組織中表達(dá)，在無核組織血小板中同樣有表達(dá)。PTGS1基因主要檢測rs5794位點，突變單體型CGCGCC顯著增加了阿司匹林抵抗的發(fā)病風(fēng)險，野生型CACGCC對阿司匹林抵抗有保護(hù)作用。