[發(fā)明專利]一種活體脂肪量沉積的無(wú)損檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010105404.2
• 申請(qǐng)日: 2020-02-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111304344A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 向海;李華;于輝;謝卓君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/04;G16B40/00
• 代理公司: 北京八月瓜知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11543
• 代理人: 李斌

本發(fā)明提供了一種活體脂肪量沉積的無(wú)損檢測(cè)方法，通過(guò)活體動(dòng)物的糞便中的菌群的豐富度來(lái)預(yù)測(cè)活體脂肪量的沉積，主要包括制備活體糞便懸浮液，菌群DNA的提取，將15f/806r引物擴(kuò)增16S rDNA的V4區(qū)，回收PCR產(chǎn)物并測(cè)序，將測(cè)定的序列進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，獲得Chao1指數(shù)、ACE指數(shù)，并構(gòu)建線性模型，結(jié)果得到的菌群的多樣性均與腹脂重、腹脂率呈顯著的線性負(fù)相關(guān)。本發(fā)明的活體脂肪量沉積的無(wú)損檢測(cè)方法能對(duì)活體脂肪沉積量以及腹部脂肪的沉積范圍實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定可靠的預(yù)測(cè)和鑒定；又能有效避免傳統(tǒng)的分子標(biāo)記方法中需要采血等有創(chuàng)采樣方式，從而避免雞因采血導(dǎo)致的傷口感染、應(yīng)激、生產(chǎn)性能下降等問(wèn)題，總體上具有簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性高、操作性強(qiáng)、結(jié)果可靠的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及活體檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種活體脂肪量沉積的無(wú)損檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

肉雞體脂(尤其是腹脂)蓄積過(guò)多一直是困擾著世界范圍內(nèi)肉雞育種工作者的重大問(wèn)題，腹脂沉積過(guò)多明顯降低飼料轉(zhuǎn)化效率，脂肪丟棄也造成浪費(fèi)，同時(shí)也污染環(huán)境，給生產(chǎn)者、加工者和消費(fèi)者造成明顯的經(jīng)濟(jì)損失。隨著消費(fèi)者消費(fèi)水平的提升和消費(fèi)需求的多樣化發(fā)展，口感佳風(fēng)味好銷售價(jià)格高的優(yōu)質(zhì)雞也逐漸受到大眾的歡迎，但消費(fèi)者對(duì)優(yōu)質(zhì)雞的要求也會(huì)更高，腹脂沉積過(guò)多會(huì)降低消費(fèi)者對(duì)優(yōu)質(zhì)雞品質(zhì)的認(rèn)可，同時(shí)也會(huì)降低飼料轉(zhuǎn)化率，提高優(yōu)質(zhì)雞本來(lái)就很高的飼養(yǎng)成本，此外，種雞過(guò)肥會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)蛋率、受精率和孵化率，加大了產(chǎn)蛋期的死淘率，影響種群的繁殖性能。所以，如果能在優(yōu)質(zhì)雞性成熟時(shí)進(jìn)行腹脂沉積的活體鑒定，將會(huì)加快低脂品系的選育，改良腹脂性狀，改善胴體品質(zhì)，帶來(lái)可觀的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。現(xiàn)有技術(shù)雖已經(jīng)可以實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)檢測(cè)，但因操作程序較復(fù)雜，容易產(chǎn)生污染和誤差，從而影響結(jié)果。同時(shí)，獲取雞的基因組信息需要對(duì)雞進(jìn)行采血，采血過(guò)程對(duì)雞會(huì)造成一定程度的外傷，會(huì)對(duì)雞尤其是種雞的生產(chǎn)性能產(chǎn)生一定影響。

如專利號(hào)為CN104138249A的專利公開(kāi)了活體活動(dòng)檢測(cè)方法、活體活動(dòng)控制方法和涉及活體活動(dòng)的信息的傳送方法，測(cè)定或控制活體的活動(dòng)狀態(tài)或其變化的方法等。又如專利號(hào)為CN103558296B公開(kāi)了一種基于脂肪酸檢測(cè)的動(dòng)物源性飼料原料鑒別方法。再如專利號(hào)為WO2007140433A3的專利公開(kāi)了檢測(cè)生物活性脂肪酸的方法和試劑。但是上述檢測(cè)方法并不能為脂肪沉積做出參考意義。

綜合上，在脂肪預(yù)測(cè)鑒定領(lǐng)域，特別是活體脂肪沉積鑒定領(lǐng)域，其實(shí)際應(yīng)用中的亟待處理的實(shí)際問(wèn)題還有很多未提出具體的解決方案。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出了一種活體脂肪量沉積的無(wú)損檢測(cè)方法以解決所述問(wèn)題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種活體脂肪量沉積的無(wú)損檢測(cè)方法，所述無(wú)損檢測(cè)方法通過(guò)活體動(dòng)物的糞便中的菌群的豐富度來(lái)預(yù)測(cè)活體脂肪量的沉積，所述的無(wú)損檢測(cè)方法包括如下步驟：

1).收集活體動(dòng)物的糞便，去除活體動(dòng)物的糞便中的雜質(zhì)，將活體動(dòng)物的糞便制備成懸浮液A并保存?zhèn)溆茫?/p>

2).將制備的懸浮液A超聲處理后得到懸浮液B；

3).采用第一試劑盒的方法提取經(jīng)過(guò)超聲處理的懸浮液B中的DNA；

4).采用體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，將515f/806r引物擴(kuò)增16S rDNA的V4區(qū)，用第二試劑盒純化回收PCR產(chǎn)物，并檢測(cè)PCR產(chǎn)物的序列；

5).將測(cè)得的序列使用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)獲得Chao1指數(shù)以及ACE指數(shù)；

6).利用獲得的Chao1指數(shù)以及ACE指數(shù)計(jì)算菌群的豐富度；

7).對(duì)得到的Chao1指數(shù)以及ACE指數(shù)分別與腹脂量、腹脂率進(jìn)行線性回歸分析，構(gòu)建線性模型得到二元一次方程：

Y＝-0.0491X+165.94，Y為腹脂重，X為Chao1指數(shù)；