[發明專利]用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備及應用

在審

• 申請號: 202010103309.9
• 申請日: 2020-02-19
• 公開（公告）號: CN111214668A
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 王晨宇;梁梓萱;黃智淼
• 申請（專利權）人: 杭州電子科技大學
• 主分類號: A61K49/18
• 分類號: A61K49/18;A61K49/16;A61K49/12;C12Q1/02
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 朱月芬

1.用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于步驟如下：

步驟(1)一步合成法制備超順磁性Fe₃O₄@PEG-COOH納米粒子

將乙酰丙酮鐵(Fe(acac)₃)和雙羧基聚乙二醇(HOOC-PEG-COOH)溶解于2-吡咯烷酮中；向溶液通入氮氣以除去氧氣，然后在轉速為300-400rpm，溫度為200-300℃的條件下反應60-90分鐘；反應完成后，持續通入氮氣直至溶液冷卻至常溫，然后向溶液加入丙酮-乙醚溶液，得到黑色粘稠沉淀物；將黑色粘稠沉淀物溶解于去離子水中，滲析一段時間以除去分子量小于12000的沉淀物；然后，將沉淀物通過丙酮-乙醚溶液反復沉降，真空干燥，制得超順磁性Fe₃O₄@PEG-COOH納米粒子；

步驟(2)碳二亞胺偶聯法制備Fe₃O₄@PEG@IgG納米粒子

將超順磁性Fe₃O₄@PEG-COOH納米粒子溶解于雙蒸餾水中，分別配置一定濃度的N-羥基磺基琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)、1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)溶液并加入到混合液中；將溶液置于恒溫震蕩箱，在轉速為300-400rpm，溫度為20-30℃的條件下反應20-40min；用碳酸氫鈉調節溶液pH值至8.0-9.0，再加入癌細胞抗體，并將溶液置于恒溫震蕩箱中，在轉速為300-400rpm，溫度為20-30℃的條件下繼續反應1-3h；反應完成后，將Fe₃O₄@PEG@IgG置于離心機中，在轉速為7000-9000RCF、溫度為2-10℃的條件下離心20-40min；除去上清液，加入適量的雙蒸餾水，重復原有條件繼續離心20-40min，再除去上清液；將沉淀物分散在0.5％胎牛血清(FBS)/磷酸鹽緩沖液(PBS)，即制得Fe₃O₄@PEG@IgG溶液；在使用前，Fe₃O₄@PEG@IgG溶液需保存在4℃的冰箱中。

2.根據權利要求1所述的用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于所述磁性納米微球Fe₃O₄@PEG@IgG納米粒子以超順磁性Fe₃O₄為內核，對磁場做出響應；聚乙二醇(PEG)為中間保護層，提供良好的生物相容性；IgG為外殼，用于特異性識別癌細胞。

3.根據權利要求1或2所述的用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于步驟(1)雙羧基聚乙二醇的分子量為2000。

4.根據權利要求1或2所述的用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于步驟(1)雙羧基聚乙二醇和乙酰丙酮鐵的質量比為(5-7):1。

5.根據權利要求1所述的用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于步驟(1)滲析時間為1-4天。

6.根據權利要求4所述的用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于步驟(2)癌細胞抗體、超順磁性Fe₃O₄@PEG-COOH納米粒子、N-羥基磺基琥珀酰亞胺和1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽的質量比為(15-30):(2-10):1:1。

7.根據權利要求6所述的用于磁馳豫靶向測定癌細胞的磁性納米微球的制備方法，其特征在于步驟(2)丙酮-乙醚溶液的丙酮、乙醚體積比為(1-2):1。