[發明專利]泊洛沙姆和/或泊洛沙胺與脂質組合中性復合物納米粒

有效

• 申請號: 202010102915.9
• 申請日: 2020-02-19
• 公開（公告）號: CN111249476B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發明（設計）人: 張龍貴;劉晨
• 申請（專利權）人: 深圳厚存納米藥業有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K9/51;A61K47/18;A61K47/10;A61K39/00;B82Y5/00;B82Y30/00;C12N15/88;A61P31/16;A61P35/00
• 代理公司: 廣東金泰智匯專利商標代理事務所(普通合伙) 44721
• 代理人: 江麗嬌

一種泊洛沙姆和/或泊洛沙胺與脂質組合的中性復合物納米粒，涉及基因治療領域，其包含泊洛沙姆和/或泊洛沙胺與脂質，包含PC或DSPC；本發明所提供復合物可用于體內外細胞的基因轉染，可以將細胞外的基因遞送至特定細胞內，使基因實現表達，既可以用于科研，尤其是指用于制備基因轉染試劑盒或細胞標記試劑盒，還可以用于人的新藥研發，尤其適用于mRNA腫瘤疫苗和mRNA流感病毒疫苗的開發。

技術領域

本發明涉及基因治療領域，具體涉及一種用于核酸遞送的泊洛沙姆和/或泊洛沙胺與脂質組合的中性復合物納米粒，以及制備這種中性復合物納米粒的方法，及其用于體內外細胞基因轉染的用途，及其在疫苗新藥領域的應用。

背景技術

基因治療是指將外源治療性基因導入靶細胞，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。基因遞送是通過遞送技術將有生物活性的外源治療性基因遞送至病人的受體細胞中，并使外源治療性基因翻譯產生蛋白多肽從而治療某種疾病。基因轉染是一種將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能的技術。近年來，隨著基因的體外合成技術、載體技術和編輯技術等生物技術的成熟，基因治療時代已經正式來臨。此前，美國FDA批準了Alnylam?Pharmaceuticals公司的兩款基于RNA干擾(RNAi)技術的基因治療藥物Onpattro和Gilvaari，它們分別用于治療遺傳性甲狀腺素轉運蛋白淀粉樣變性(hereditary?transthyretin?amyloidosis?hATTR)多發神經病變和急性肝卟啉癥(AHP)，這在基因治療領域的新藥開發史上具有里程碑意義。然而在另一領域，隨著如蛋白替代療法、蛋白補充療法、癌癥和傳染病的疫苗接種等更多關于mRNA應用場景的發現，人們開始著手克服mRNA的缺點如體內外穩定性、短半衰期和不利的免疫原性等，以挖掘其更多的功能。與DNA基因療法相比，IVTmRNA療法有自己的優勢。IVTmRNA不需要進入細胞核就能發揮作用；相比之下，DNA療法需要進入細胞核轉錄成RNA。這主要是由于mRNA是在細胞質起作用，不需要穿越難以逾越的細胞核膜，因此mRNA不會整合進入靶細胞的基因組，也就不存在插入誘變的風險。基于mRNA的療法和藥物開發引起了科學家與投資者的廣泛興趣。

DNA疫苗是20世紀90年代發展起來的新型疫苗，是繼減毒疫苗、基因工程疫苗之后的第3代疫苗。DNA疫苗不僅有預防疾病的作用，同時還具有治療疾病的作用。DNA疫苗是由插入一種或多種外源基因的質粒DNA和真核啟動調控基因等元件構成的，載有外源抗原的質粒DNA在一種真核啟動子和加尾信號以及相關增強子等基因單元的控制下，可在哺乳動物的各類細胞中表達出相關的抗原蛋白。將重組有外源抗原編碼基因的質粒，利用某種基因遞送方法導入人或動物的細胞內，通過宿主細胞的轉錄系統，在被免疫對象機體的活體細胞內合成抗原蛋白，從而誘導機體產生免疫應答。DNA疫苗具有以下優點：DNA接種載體(如質粒)的結構簡單，提純質粒DNA的工藝簡便，因而生產成本較低，且適于大批量生產；DNA分子克隆比較容易，使得DNA疫苗能根據需要隨時進行更新；DNA分子很穩定，可制成DNA疫苗凍干苗，使用時在鹽溶液中可恢復原有活性，因而便于運輸和保存；比傳統疫苗安全，雖然DNA疫苗具有與弱毒疫苗相當的免疫原性，能激活細胞毒性T淋巴細胞而誘導細胞免疫，但由于DNA序列編碼的僅是單一的一段病毒基因，基本沒有毒性逆轉的可能，因此不存在減毒疫苗毒力回升的危險，而且由于機體免疫系統中DNA疫苗的抗原相關表位比較穩定，因此DNA疫苗也不像弱毒疫苗或亞單位疫苗那樣，會出現表位丟失的現象。質粒本身可作為佐劑，因此使用DNA疫苗不用加佐劑，既降低成本又方便使用；將多種質粒DNA簡單混合，就可將生化特性類似的抗原(如來源于相同病原菌的不同菌株)或一種病原體的多種不同抗原結合在一起，組成多價疫苗，從而使一種DNA疫苗能夠誘導產生針對多個抗原表位的免疫保護作用，使DNA疫苗生產的靈活性大大增加。但DNA疫苗存在以下嚴重的安全性問題：外源DNA進入機體后是否整合到宿主基因組，導致癌基因激活或抑癌基因失活；疫苗DNA長期在體內表達是否會誘導機體產生免疫耐受，長遠來說，導致機體免疫功能低下；疫苗DNA作為一種外來物質，是否會引起機體產生抗DNA抗體；DNA疫苗誘導的CTL反應是否會對其他細胞產生殺傷作用。這些潛在的風險限制了DNA疫苗的廣泛應用。