[發明專利]一種分離和/或富集結核分枝桿菌的方法

有效

• 申請號: 202010101771.5
• 申請日: 2020-02-19
• 公開（公告）號: CN111269856B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 曹廷明;孫照剛;賈紅彥;李自慧;杜鳳嬌;戴廣明;褚洪遷;張宗德
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京胸科醫院;北京市結核病胸部腫瘤研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C07K14/35;C12N15/31;G01N33/68;G01N33/569;C12R1/32
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

本發明公開了一種分離和/或富集結核分枝桿菌的方法。本發明的發明人基于結核分枝桿菌蛋白質組芯片的蛋白?蛋白互作實驗篩選和鑒定與Rv1875蛋白互作的結核蛋白。結果表明，Rv875蛋白可與Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白中的任一個結合，Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白均為結核分枝桿菌固有蛋白。因此，Rv1875蛋白可以分離結核分枝桿菌和/或富集結核分枝桿菌和/或檢測結核分枝桿菌。本發明具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及一種分離和/或富集結核分枝桿菌的方法。

背景技術

結核病是由細胞內細菌病原體結核分枝桿菌引起的慢性傳染病。由于結核分枝桿菌其獨特的致病特點及流行和傳播方式，特別是近年來耐藥結核分枝桿菌的產生以及與人類免疫缺陷癥病毒(HIV)的交叉感染等原因導致結核病的流行再度呈現上升趨勢。結核分枝桿菌是一種胞內感染菌，它是最成功的病原體之一，已經進化出適應宿主細胞和逃避免疫監視的各種策略。結核分枝桿菌經過呼吸道進入人體后，主要在巨噬細胞內寄生，并采用多種策略逃避宿主細胞的免疫殺傷作用，其可以在巨噬細胞內長期存活并緩慢增殖。當宿主免疫力低下時，休眠的結核分枝桿菌可以被重新活化，導致機體發展為活動性結核病。感染結核分枝桿菌后病原體能在宿主體內長期潛伏或造成持續性感染，為該疾病的治療和預防造成了極大的障礙。此外，現階段結核病的治療難點還在于多重耐藥性和廣泛耐藥性結核病。結核病新藥的匱乏以及結核分枝桿菌相關基礎研究的不足是耐藥性結核病治愈率低下的主要原因。因此，迫切需要尋找新的藥物靶點，開發新的抗結核病藥物來治療結結核病。

確定結核分枝桿菌自身蛋白間的蛋白質-蛋白質相互作用能夠更深入的表征細菌在宿主體內存活和結核發病的分子機制，也將有助于尋找到新的抗結核藥物靶點，開發出新的抗結核藥物，以利于對結核病的治療。Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白是結核分枝桿菌的固有蛋白，通過檢測待檢標本中這些結核蛋白之中的任一蛋白即可鑒定病原菌-結核分枝桿菌的存在，因此可以借此來實現對結核感染或結核病的快速診斷。此外，已有轉座子突變實驗證實，Rv3009c蛋白為結核分枝桿菌體外生長必需基因，編碼Rv3009c蛋白的基因被破壞時將導致體外H37Rv的生長缺陷(DeJesus M A，Gerrick E R，Xu W，Park S W，et al.Comprehensive Essentiality Analysis of theMycobacterium tuberculosis Genome via Saturating TransposonMutagenesis.MBio.2017Jan 17；8(1).pii:e02133-16.)。Rv3009c蛋白可能被作為新的抗結核藥物靶點來開發新的抗結核藥物，用于治療結核病。

研究結核分枝桿菌自身蛋白之間的相互作用可以更深入的表征細菌在宿主體內存活和結核病發病的分子機制，也將有助于尋找到新的抗結核藥物靶點。

發明內容

本發明的目的是檢測結核分枝桿菌。

本發明首先保護Rv1875蛋白在制備結核分枝桿菌分離試劑、結核分枝桿菌富集試劑、結核分枝桿菌檢測試劑、結核疫苗和抗結核藥物中至少一種的應用。

上述應用中，所述結核分枝桿菌分離試劑、所述結核分枝桿菌富集試劑和所述結核分枝桿菌檢測試劑均可通過Rv1875蛋白和結核分枝桿菌固有蛋白結合實現。所述結核分枝桿菌固有蛋白可為Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白中的至少一種。

本發明還保護編碼Rv1875蛋白的核酸分子在制備結核分枝桿菌分離試劑、結核分枝桿菌富集試劑、結核分枝桿菌檢測試劑、結核疫苗和抗結核藥物中至少一種的應用。