[發明專利]一種用于預測羽衣甘藍葉緣性狀的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202010100575.6
• 申請日: 2020-02-19
• 公開（公告）號: CN111321240B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 祝朋芳;馮馨;毛洪玉;楊馨茹;李昕
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責任公司 21101
• 代理人: 胡野

本發明涉及一種用于預測羽衣甘藍葉緣性狀的分子標記的使用方法，所述分子標記為CAPS_F和CAPS_R，所述CAPS_F核苷酸序列見SEQ ID NO：1，所述CAPS_R核苷酸序列見SEQ ID NO：2，所述分子標記的應用于早期預測在任意發育階段下栽培的羽衣甘藍的葉緣缺刻性狀。本發明建立了一種應用CAPS分子標記在不受發育階段影響的情況下，早期預測羽衣甘藍葉緣缺刻性狀的方法，為羽衣甘藍葉形鑒定與新品種選育具有重要的科學指導意義。

技術領域

本發明屬于植物分子領域，具體涉及一種用于預測羽衣甘藍葉緣性狀的分子標記及其應用，可用于羽衣甘藍葉形分子標記輔助選擇育種。

背景技術

羽衣甘藍（Brassica oleracea var. acephala）是十字花科蕓薹屬二年生觀葉植物，葉形葉色豐富絢麗，美觀大方。葉形是羽衣甘藍的重要觀賞性狀之一，有裂葉、圓葉、皺葉等多種類型。羽衣甘藍進入蓮座期葉發育成熟，葉緣發育完全。

傳統的表型鑒定方法鑒定羽衣甘藍葉形性狀時，往往需要到蓮座期才能準確鑒定，而羽衣甘藍從播種到蓮座期需要3個月的時間，由于羽衣甘藍不同發育時期的葉片還受到環境因素的影響，影響表型的判斷。此外，羽衣甘藍為二年生植物，營養體春化類型，難以加代，一旦延遲表型鑒定期，會浪費育種周期中的一整年時間。DNA分子標記能夠對植物基因組中某一段特定的 DNA 片段進行檢測和分析，它具有不受植物環境條件與發育階段差異的影響，不受植物組織類型差異或基因是否啟動表達的影響，所需 DNA 模板量少，操作簡單快捷等優點，是植物分子標記輔助選擇育種的重要科學依據。CAPS標記是利用特異引物PCR與限制性酶切相結合而產生的一種檢測SNP位點的DNA標記，該標記具有共顯性、位點特異性、操作簡單快速、成本低廉等特點。目前尚未見到通過分子標記預測羽衣甘藍葉緣缺刻性狀的方法。

本發明要解決的技術問題是：通過開發CAPS分子標記的方法在播種后一周內的子葉期即可鑒定葉緣裂刻性狀，加快育種進程，對于羽衣甘藍葉形育種具有重要的意義。

發明內容

為了彌補上述現有技術的不足，本發明的目的是提出一種用于預測羽衣甘藍葉緣性狀的分子標記及其應用，能夠在羽衣甘藍任意發育階段下鑒定葉緣裂刻性狀，提前預測羽衣甘藍的葉緣性狀，加快育種進程。

本發明提出了一種用于預測羽衣甘藍葉緣性狀的分子標記（序列見SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2），

所述分子標記為：

CAPS_F: cgatcatcgtcaaccacatag（SEQ ID NO：1）

CAPS_R: tagaactccacacaagactg（SEQ ID NO：2）

本發明還提出了所述分子標記的應用，可以早期預測在任意發育階段下栽培的羽衣甘藍的葉緣缺刻性狀。

本發明還提出了所述分子標記的使用方法：其技術要點是：

（1）提取羽衣甘藍基因組DNA

采用改良CTAB方法提取羽衣甘藍基因組DNA，具體方法如下：

①稱取0.15 g葉片于研缽中，液氮保護下充分研磨，迅速轉移粉末至2 mL離心管中；

②CTAB提取緩沖液配制：稱取十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）25g、氯化鈉40.95 g、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）25g，量取50mL的1mol/L Tris-Hcl (pH=8)、20mL 的1 mol/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA，pH=8)，去離子水定容至500mL，121℃高壓滅菌20 min，備用；

③向離心管中加入700 μL 65℃的CTAB提取緩沖液（含2% β-巰基乙醇），充分混勻，置于65℃水浴鍋中水浴1 h，每10 min上下顛倒混勻一次；