[發明專利]一種蘋果炭疽葉枯病生防菌劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010098924.5
• 申請日: 2020-02-18
• 公開（公告）號: CN111280183B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 王彩霞;練森;李保華;朱德娟;張清明
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/27;A01N31/08;A01N25/04;A01P1/00;C12R1/38
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 37277
• 代理人: 韓耀朋

本發明公開了一種蘋果炭疽葉枯病生防菌劑，所述蘋果炭疽葉枯病生防菌劑是丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)菌株B?1菌懸液。本發明丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)B?1對蘋果炭疽葉枯病有顯著的防治效果，實施例的研究表明，菌株B?1可顯著抑制蘋果炭疽葉枯病菌菌絲的生長，菌株B?1的菌懸液對蘋果炭疽葉枯病的防治效果均在60％以上；本發明蘋果炭疽葉枯病生防菌劑，對環境友好，大規模生產的發酵工藝簡單、生產成本低廉。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，特別涉及一種蘋果炭疽葉枯病生防菌劑及其制備方法和應用。

背景技術

蘋果含有豐富的碳水化合物、維生素和無機鹽等物質，是人們重要的營養來源和物質基礎。在我國蘋果作為重要的經濟作物和出口水果，栽培面積和產量均居世界首位，蘋果是我國北方農民增收的重要支柱產業之一，但是病害嚴重制約了我國蘋果產業的健康發展。

由炭疽病菌(Glomerella cingulata)引起的蘋果炭疽葉枯病(Glomerella leafspot, GLS)，是近年我國蘋果上新發現的一種病害，其主要危害蘋果葉片和果實，導致葉片焦枯，提前大量脫落。蘋果果實受侵染后在果面上形成直徑1-2 mm的黑色病斑，不僅直接降低果品產量和品質，造成嚴重的經濟損失，而且嚴重消弱樹勢，降低樹體抗病力，誘發枝干病害及根部病害的危害。蘋果炭疽葉枯病2012年在我國首次報道，2014年已擴散蔓延至大部分蘋果主產區。其中，如：嘎啦、金冠、秦冠等品種高度感病，富士、紅星等品種抗性強。

利用抗病基因育種是克服蘋果炭疽葉枯病的理想策略，但相關研究尚未取得突破性進展，離應用于生產還有很遠的距離。目前，蘋果炭疽葉枯病的防控主要依靠化學殺菌劑，頻繁使用化學殺菌劑不僅使果園生態環境惡化，給食品安全帶來極大隱患；而且蘋果炭疽葉枯病發病迅速，潛育期只有2-4 d，病原菌一旦侵入寄主組織，幾乎沒有用藥防治時間。如該病無法得到有效控制，嘎啦、金冠、秦冠等感病優良品種在我國將面臨被淘汰的風險。化學殺菌劑的廣泛使用，給人類健康及環境安全帶來嚴重威脅，進而帶來的抗藥性問題也逐漸顯露。因此，尋求可替代化學殺菌劑的安全有效防治措施已成為蘋果生產和病害防治中亟待解決的問題。

采用生防菌劑防治蘋果炭疽葉枯病對環境友好，可以避免化學防治帶來的一系列問題。生防菌劑可減少或替代化學藥劑的使用，從而達到防治蘋果炭疽葉枯病的目的。現有技術中還沒有采用丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)制備蘋果炭疽葉枯病生防菌劑，用于蘋果炭疽葉枯病防治的報道。如何解決上述技術問題，是目前微生物技術領域需要解決的技術問題。

發明內容

本發明所提供的丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae) B-1，于2015年12月31日保藏于：中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC NO: M2015813，保藏地址為：湖北省武漢市，洪山區八一路。

本發明所提供的蘋果炭疽葉枯病生防菌劑是丁香假單胞菌(Pseudomonassyringae) 菌株B-1菌懸液。

本發明所提供的蘋果炭疽葉枯病生防菌劑是濃度為10³-10⁷ cfu·mL^-1的丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae) 菌株B-1菌懸液。

本發明所提供的是濃度為10⁷ cfu·mL^-1的丁香假單胞菌(Pseudomonassyringae) 菌株B-1菌懸液。

本發明所提供的蘋果炭疽葉枯病生防菌劑用于蘋果炭疽葉枯病的防治。

本發明所提供的蘋果炭疽葉枯病生防菌劑的制備方法，包括以下步驟：

（1）將菌株B-1劃線接種在NA培養基中，于30℃恒溫活化培養24 h，得到活化的菌株B-1單菌落A；