[發明專利]一種來自貓的新過敏原NPC2

在審

• 申請號: 202010098315.X
• 申請日: 2020-02-18
• 公開（公告）號: CN111233995A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 魏繼福;朱丹萱;許志強;張成
• 申請（專利權）人: 江蘇省人民醫院（南京醫科大學第一附屬醫院）
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/70;C12N15/12;G01N33/68;A61K39/35;A61P37/08
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 高玲玲

本發明公開了一種來自貓(Felis domesticus)的新過敏原蛋白NPC2的鑒定。主要通過克隆過敏原NPC2基因，并優化其密碼子。利用優化后的NPC2基因構建pET28a表達載體并轉化大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)，IPTG誘導胞內表達His融合蛋白，采用Ni?NTA親和層析純化后，復性得到高純度重組NPC2蛋白。ELISA和Western Blot結果表明貓的NPC2蛋白存在25.5％的致敏率且和狗過敏原Can f 7存在交叉過敏活性。

技術領域

本發明屬于分子生物學，免疫學，生物信息學領域，具體涉及過敏性疾病領域，特別涉及從貓中鑒定新型過敏原NPC2。

背景技術

過敏性疾病，又稱變態反應性疾病，是一種常見的慢性炎癥性疾病。隨著工業化社會的發展，人們生活方式和生態環境的改變，其發病率目前約占世界人口的25％，且逐年遞增，已嚴重影響人們生活質量，被世界衛生組織(WHO)列入21世紀重點防治的三大疾病之一。過敏性疾病，主要包括花粉癥、過敏性鼻炎、過敏性支氣管哮喘、過敏性皮炎、蕁麻疹、血管神經性水腫等其他過敏反應，這些疾病主要由存在于空氣中的過敏原引起，如花粉、屋塵螨、動物皮屑、蟑螂、真菌等。此外，一些常見的食品例如花生、大豆、牛奶、雞蛋、魚蝦等也含有過敏原成分。

目前檢測過敏原的常用方式為過敏原皮膚點刺試驗、血清學檢測、過敏原激發試驗。而過敏性疾病的治療主要包含避免接觸過敏原、藥物治療、特異性免疫治療(脫敏治療)，其中脫敏治療被WHO認為是唯一可根治過敏性疾病的治療方法，其主要通過給予患者免疫原制劑以誘導免疫耐受。過敏原的診斷和治療均主要依賴于過敏原的粗提物，但商品化的粗提物存在以下問題：①粗提物中過敏原組份的種類無法確定，其不但含有過敏原成分，還含有大量非特異性抗原；②粗提物中過敏原各組份含量不一導致其產生效力不同；③粗提物的來源、提取方法不同使得各批次之間存在差異。因此在檢測過程中容易出現假陽性或陰性結果，在免疫治療過程中會產出局部、系統、乃至致命的反應。基于以上問題，我們迫切需要分離和鑒定出過敏原各個組份，明確主要過敏原和次要過敏原及其過敏強度必不可少。隨著分子克隆和基因工程技術的不斷發展，通過克隆表達在生物、結構、免疫學方面與天然蛋白具有同等效力的重組過敏原蛋白，利用純度高、性質單一的過敏原進行臨床診斷和免疫治療是當今過敏性疾病診療的發展趨勢。