[發明專利]一種反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1及其應用

有效

• 申請號: 202010097562.8
• 申請日: 2020-02-17
• 公開（公告）號: CN111187765B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 姜雨;潘香羽;陳賢情;王文
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36;C12N15/56;C12N15/81;A23K20/189;A61K38/47;A61P31/04
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1及其應用。本發明利用反芻動物比較基因組結果，對反芻動物進化的新基因進行掃描，發現了一個反芻動物特異的溶菌酶，且在瘤胃組織中高表達。本發明利用pPIC9K載體與反芻動物瘤胃特異的溶菌酶LYZ1序列構建出甲醇誘導性畢赤酵母表達菌株，使反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1在畢赤酵母中能夠高效的分泌表達，獲得的以山羊為代表的溶菌酶LYZ1具有抑制金黃色葡萄球菌的作用，可以作為極具應用潛力、安全的抗菌藥物替代物。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種反芻動物瘤胃特異溶菌酶1(lysozyme-1,LYZ1)在畢赤酵母中的分泌表達方法及應用。

背景技術

溶菌酶作為一種天然的抗菌劑，廣泛存在于人及哺乳動物等的多種組織器官中，具有抗細菌、真菌及腫瘤等多種藥理作用，具有生物相容性好、對組織無刺激性、無毒性的特點，已被制作為一種性質優良、殺傷病原微生物而不破壞機體的酶制劑。溶菌酶根據分子結構和來源不同分為6類：植物溶菌酶、微生物溶菌酶、噬菌體溶菌酶、C型(蛋清溶菌酶、胃溶菌酶)、G型(鵝型溶菌酶)和I型(無脊椎動物溶菌酶)，其中C型、G型和噬菌體溶菌酶最常見。目前為止，已經從反芻動物中鑒定出多種溶菌酶，但仍有許多種類的溶菌酶尚未被發現。而且對于已經制備的溶菌酶(例如，付世新等報道了“牛乳溶菌酶在畢赤酵母中的分泌表達及活性分析”)，其作為飼料添加劑直接飼喂動物及作為抗生素的替代物的安全性是未知的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1及其應用。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1，該溶菌酶LYZ1的編碼序列包括以下DNA序列，或者所述溶菌酶LYZ1的編碼序列選自與以下DNA序列具有95％以上同源性的來源于反芻動物基因組的序列：

優選的，所述反芻動物選自山羊，山羊的溶菌酶LYZ1的氨基酸序列為：

KKFERCELARTLKRLGLDGYRGVSLANWMCLARWESNYNTRATNYNRGDKSTDYGIFQINSRWWCNDGKTPRAVNACRIPCSALLKDDITQAVACAKRVVSDPQGIKAWVAWRNKCQNKDLRSYVKGCRV。

優選的，所述溶菌酶LYZ1具有體外抑制金黃色葡萄球菌的活性。

上述反芻動物溶菌酶LYZ1在畢赤酵母中的分泌表達方法，包括以下步驟：

1)構建畢赤酵母重組菌株

利用反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1的編碼序列構建重組載體，將重組載體轉化畢赤酵母感受態細胞，得到畢赤酵母重組菌株；

2)發酵培養

將畢赤酵母重組菌株通過發酵進行重組溶菌酶LYZ1的誘導表達，得到發酵液；

3)收集發酵液上清，或將收集的發酵液上清濃縮，得到重組溶菌酶LYZ1蛋白樣品。

優選的，所述重組溶菌酶LYZ1的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。

上述反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1在制備抑制革蘭氏陽性菌的抗菌藥物中的應用。

上述反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1在制備抑制金黃色葡萄球菌的抗菌藥物中的應用。

上述反芻動物瘤胃特異溶菌酶LYZ1在制備飼料添加劑中的應用。

本發明的有益效果體現在：