[發明專利]一種用于檢測酪氨酸酶活性的SERS基底及利用該基底檢測酪氨酸酶活性的方法

有效

• 申請號: 202010096667.1
• 申請日: 2020-02-17
• 公開（公告）號: CN111157512B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 陸德嬋;陳彩柔;盧玉棟;黃祖芳;劉顯鵬;沈慧英
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 福州科揚專利事務所(普通合伙) 35001
• 代理人: 李曉芬

1.一種用于檢測酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于，由以下步方法制得：

(1)Au^PB@Au NPs的合成

取10mL納米金膠溶液，加入10-20μL濃度為0.1mol/L的普魯士藍(PB)溶液作為拉曼信號分子，攪拌混合均勻后離心，重新懸浮于10mL超純水中，得Au@PB膠體；往10mL的制備好的Au@PB膠體中加入250μL濃度為6*10^-2mol/L的檸檬酸鈉溶液，磁力攪拌加熱至沸騰后，加入2.5mL濃度為1mmol/L氯金酸溶液后停止加熱，繼續磁力攪拌1h后，將膠體離心洗滌2次，重新分散于5mL超純水中，得到Au^PB@Au膠體；

(2)Fe(NTA)溶液的合成

首先取濃度為10^-3M的九水硝酸鐵溶液和濃度為10^-3M的氨三乙酸三鈉溶液按體積1:1混合后,往溶液中添加pH調節劑調節Fe(NTA)溶液的pH為7.0，混合液靜置，得Fe(NTA)溶液；

(3)Au^PB@Au-Fe(NTA)SERS基底的合成

將步驟(1)制備好的Au^PB@Au膠體與步驟(2)制備的Fe(NTA)溶液按體積1:1混合后，攪拌混合后，離心洗滌除去未反應的Fe(NTA)，去除上清液，剩下Au^PB@Au-Fe(NTA)膠體備用；

步驟(2)的pH調節劑為濃度為0.1mol/L的氫氧化鈉溶液。

2.根據權利要求1所述一種用于檢測酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于，所述納米金膠溶液的制備方法如下：取100mL質量分數為0.01％的氯金酸溶液在磁力攪拌下加熱至沸騰；然后取1-1.5mL質量分數為1％檸檬酸鈉溶液，加入到沸騰的上述氯金酸溶液中，待沸騰15min后，反應結束，冷卻至室溫，制成納米金溶膠。

3.根據權利要求1所述一種用于檢測酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于：步驟(3)的攪拌時間為至少30min。

4.一種利用權利要求1-3任一項所述的SERS基底檢測酪氨酸酶的方法，其特征在于：

S1、制備不同濃度的酪氨酸酶溶液標準溶液，加入多巴胺進行共培養，接著加入Au^PB@Au-Fe(NTA)SERS基底混勻后，進行拉曼檢測；記錄Fe(NTA)DA的拉曼特征峰1480cm^-1信號與普魯士藍2121cm^-1信號強度的比值I₁₄₈₀/₂₁₂₁為縱坐標，酪氨酸酶活性為橫坐標作出相對應的工作曲線；

S2、檢測待測樣品中酪氨酸酶的回收率(％)：將步驟S1中所述酪氨酸酶的標準溶液替換為待測樣品的溶液，按照所述步驟S1所述方法檢測所述待測樣品，對照工作曲線，計算得出細胞裂解液中酪氨酸酶的回收率。

5.根據權利要求4所述一種檢測酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述工作曲線為Y＝0.163Log[C]+4.414，其中Y為I₁₄₈₀/₂₁₂₁；C為酪氨酸酶的濃度。

6.根據權利要求5所述一種檢測酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述酪氨酸酶的最低檢測限0.0003U/mL。

7.根據權利要求6所述一種檢測酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述步驟S1中底物多巴胺的濃度為10^-3M，多巴胺與酪氨酸酶的體積比為10:1，共培養時間為3min。

8.根據權利要求7所述一種檢測酪氨酸酶的方法，其特征在于：步驟S2中檢測待測樣品為Hela細胞裂解液。