[發(fā)明專利]一種高效洗滌液

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010096626.2
• 申請日: 2020-02-17
• 公開（公告）號: CN111378649A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊俊;范明姣;唐續(xù);高駿
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州達(dá)正生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發(fā)明公開了一種高效洗滌液。它包括70％～80％V/V乙醇、50mM～100mM NaCl、0.5mM～1mM EDTA、5mM～15mM Tris?HCl、1mg/ml～1.5mg/ml BSA，溶劑為DEPC水。本發(fā)明的洗滌液中，EDTA可以螯合多種離子，乙醇可清洗掉有機(jī)溶劑，BSA可去除樣本在裂解過程中產(chǎn)生的蛋白，進(jìn)而得到純度較高的核酸。即本發(fā)明采用高效洗滌液系統(tǒng)，可以將雜質(zhì)鹽類、蛋白、糖類、有機(jī)溶劑等沖洗干凈，獲得高質(zhì)量高純度的核酸。該洗滌液系統(tǒng)配置方法簡單，易操作，且不含有毒有害成分。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于DNA提取領(lǐng)域，具體涉及一種高效洗滌液。

背景技術(shù)：

核酸提取是各種分子生物學(xué)檢測方法的基礎(chǔ)，高效完整地提取RNA或DNA是PCR擴(kuò)增、文庫構(gòu)建、測序等工作的基礎(chǔ)。不過在PCR分子診斷過程中，獲得的RNA或DNA的總拷貝數(shù)和質(zhì)量純度會直接影響到后續(xù)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，所以，獲得高純度高質(zhì)量的核酸是下游研究順利進(jìn)行的最基本前提。

試劑盒法是目前臨床應(yīng)用廣泛且最簡便的方法，商品化的核酸提取試劑盒種類繁多，性能迥異，但提取效率不盡相同，試劑盒主要組成有裂解液、蛋白酶K溶液、結(jié)合液、洗滌液、洗脫液，2小時內(nèi)即可完成大批量樣本核酸提取工作，但目前常用的試劑盒往往存在一個問題：1.洗滌液純化效果不好，獲得的核酸濃度高但是純度很低，常常摻雜有許多雜質(zhì)，例如鹽類、蛋白、糖類、有機(jī)溶劑等，PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是一種用于擴(kuò)增特定的核酸片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其最大特點(diǎn)，是能將微量的核酸進(jìn)行大量的富集和加倍，從而達(dá)到便于檢測微量核酸的目的。其對于核酸的純度要求極高，當(dāng)核酸有污染時往往會嚴(yán)重影響PCR分子診斷，進(jìn)而影響下游實(shí)驗(yàn)的開展。

因此，現(xiàn)在急需一種高效洗滌液來更好地解決核酸純度低的難題。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供了一種高效洗滌液配方，采用該洗滌液純化DNA和RNA可以將雜質(zhì)鹽類、蛋白、糖類、有機(jī)溶劑等沖洗掉，獲得純度較高的核酸。

本發(fā)明的高效洗滌液，包括70％～80％V/V乙醇、50mM～100mM NaCl、0.5mM～1mMEDTA、5mM～15mM Tris-HCl、1mg/ml～1.5mg/ml BSA，溶劑為DEPC水。

優(yōu)選，包括70％V/V乙醇、50mM NaCl、0.5mM EDTA、10mM Tris-HCl、1mg/ml BSA，溶劑為DEPC水。

本發(fā)明的洗滌液中，EDTA可以螯合多種離子，乙醇可清洗掉有機(jī)溶劑，BSA可去除樣本在裂解過程中產(chǎn)生的蛋白，進(jìn)而得到純度較高的核酸。即本發(fā)明采用高效洗滌液系統(tǒng)，可以將雜質(zhì)鹽類、蛋白、糖類、有機(jī)溶劑等沖洗干凈，獲得高質(zhì)量高純度的核酸。該洗滌液系統(tǒng)配置方法簡單，易操作，且不含有毒有害成分。

具體實(shí)施方式：

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。除非另有定義或說明，本專利所述的科學(xué)技術(shù)術(shù)語與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解具有相同的含義。

實(shí)施例1：

高效洗滌液成分包括：70％v/v乙醇，50mMNaCl，0.5mMEDTA，10mMTris-Hcl，1mg/mlBSA，溶劑為DEPC水。其配制方法是將各成分按其含量混合均勻。

對100例樣品分離純化RNA，并與常用試劑盒進(jìn)行平行對比，樣品為2年內(nèi)的石蠟包埋臨床樣本。

1、提取RNA

所用試劑除洗滌液為本發(fā)明的高效洗滌液，其他試劑均為常用試劑盒組分，按照常用試劑盒說明書進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)。