[發(fā)明專利]一種防止新冠狀病毒樣本RNA降解的新方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010096543.3
• 申請(qǐng)日: 2020-02-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111763765B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張纓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院秦淮醫(yī)療區(qū)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6806;C12R1/93
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 朱玲艷

本發(fā)明涉及一種防止新冠狀病毒樣本RNA降解的新方法，屬醫(yī)療領(lǐng)域。本發(fā)明創(chuàng)新性地將強(qiáng)心甙作為防止RNA降解的主要成分，實(shí)施方式有多種，為2019新型冠狀病毒的檢測(cè)提供了創(chuàng)新型思路，也可以用于防止其他種類RNA降解。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種防止新冠狀病毒樣本RNA降解的新方法，屬醫(yī)療領(lǐng)域。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒肺炎（Novel Coronavirus Pneumonia, NCP）是由2019新型冠狀病毒（2019 Novel Coronavirus, 2019-nCoV）感染引起的一種急性傳染性疾病。確定是否存在2019-nCoV感染的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，就是能在患者體內(nèi)找到2019-nCoV的存在。而要想找到2019-nCoV并明進(jìn)行確判定，需要依靠測(cè)定2019-nCoV核酸。因此，保證2019-nCoV核酸檢測(cè)陽(yáng)性率，直接關(guān)系到疫情控制質(zhì)量。

2019新型冠狀病毒（2019 Novel Coronavirus, 2019-nCoV）是一種RNA型病毒。RNA病毒是病毒的一種，屬于一級(jí)。它們的遺傳物質(zhì)是核糖核酸（RNA ribonucleic acid）。2019新型冠狀病毒主要是感染呼吸道。檢測(cè)和確定是否因2019新型冠狀病毒感染，首先是將痰液、咽拭子樣本、肺泡灌洗液等進(jìn)行收集，即首先要完成標(biāo)本采集、運(yùn)輸及保存，然后是進(jìn)行熒光-PCR操作，最終確定結(jié)果。

RNA的英文名稱為Ribonucleic Acid，中文名稱為核糖核酸。存在于生物細(xì)胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子。因此，RNA本質(zhì)上是蛋白質(zhì)。RNA在離體后，很容易降解，導(dǎo)致檢出率低甚至假陰性。導(dǎo)致RNA降解的原因很多，但主要原因是因?yàn)椋环矫鍾NA極不穩(wěn)定，另一方面就是樣本內(nèi)能夠分解RNA的酶很多。由此不難看出，在樣本的保存階段，確保RNA不降解或輕微降解，是極其關(guān)鍵的基礎(chǔ)性環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到后繼操作質(zhì)量和檢出率。因此，收集樣本之后，直至進(jìn)入正式檢測(cè)流程之前，需要用技術(shù)手段保證樣本中的病毒RNA不降解，以確保后繼檢測(cè)的檢出率。

目前，防止樣本中病毒RNA降解的方法，主要是在保存液中使用蛋白質(zhì)變性劑，如異硫氰酸胍、鹽酸胍、尿素、酚類等。這些常規(guī)方法，均有其不足之處。例如胍類、尿素等，必須濃度較高才可以發(fā)揮作用，由此會(huì)導(dǎo)致在儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中，溫度較低時(shí)容易產(chǎn)生結(jié)晶和沉淀。酚類等物質(zhì)本身就是一種原型質(zhì)毒物，其水溶液很易通過(guò)皮膚引起全身中毒，其蒸氣由呼吸道吸入，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)損害更大。更何況還需要加熱使用，方法學(xué)方面不理想。

發(fā)明人因長(zhǎng)期從事病理技術(shù)和診斷工作，使用的樣本保存液種類較多，對(duì)樣本保存技術(shù)十分熟悉。在本次新冠病毒疫情爆發(fā)后，受長(zhǎng)期使用的含植物提取物細(xì)胞保存液技術(shù)的啟發(fā)，探索出了可防止病毒樣本RNA降解的新技術(shù)路線。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人研究的解決方案，是要實(shí)現(xiàn)在病毒樣本保存過(guò)程中，針對(duì)2019-nCoV核酸檢測(cè)的需要來(lái)防止RNA降解。進(jìn)一步地，可以針對(duì)多種病毒樣本在保存中防止RNA降解。

發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，以支持核酸檢測(cè)為目標(biāo)的防止RNA降解的技術(shù)路線，要實(shí)現(xiàn)三個(gè)技術(shù)目標(biāo)。首先是，在病毒樣本進(jìn)入保存液體系后，要快速對(duì)RNA進(jìn)行變性，防止降解。其次是，要將樣本中包含的多種可以分解RNA的酶進(jìn)行失活，以防止這些酶分解RNA。最后，還要能使已經(jīng)變性的RNA復(fù)活，便于進(jìn)行后繼擴(kuò)增等檢測(cè)程序。