[發(fā)明專利]用于保存細(xì)胞的組合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010096188.X
• 申請日: 2020-02-17
• 公開（公告）號: CN111466367B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張雷;楊靜;劉敏;馬一鳴;郭洪爽
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 楊歡

本發(fā)明屬于細(xì)胞保存領(lǐng)域，具體涉及一種用于保存細(xì)胞的組合物,包括細(xì)胞內(nèi)凍存保護(hù)劑以及細(xì)胞外凍存保護(hù)劑；所述的細(xì)胞內(nèi)凍存保護(hù)劑為兩性離子分子；所述的細(xì)胞外凍存保護(hù)劑為兩性離子聚合物；所述的兩性離子聚合物為UCST功能單元與LCST功能單元的聚合物。本發(fā)明利用溫敏型兩性離子聚合物特殊的溫敏響應(yīng)性質(zhì)，即溫敏型兩性離子聚合物在≤0℃，0℃?37℃，≥37℃的具有不同物理狀態(tài)，將兩性離子分子分別結(jié)合UCST型溫敏型兩性離子聚合物，LCST型溫敏型兩性離子聚合物，以及UCST/LCST型溫敏型兩性離子聚合物來保存細(xì)胞，保存效率極高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞保存領(lǐng)域，具體涉及一種用于保存細(xì)胞的組合物。

背景技術(shù)

細(xì)胞作為生命的基本單元，不僅可以使活體實驗轉(zhuǎn)移到體外，還可以用于細(xì)胞治療，因此細(xì)胞保存尤為重要。目前最常用的保存細(xì)胞的手段是冷凍保存，在極度低溫下細(xì)胞新陳代謝停止，處于“休眠”或“假死”的狀態(tài)。然而，細(xì)胞的冷凍保存過程中，冰晶形成和生長將對細(xì)胞造成溶質(zhì)損傷和機械損傷，添加凍存保護(hù)劑可保護(hù)細(xì)胞成活。目前，最常用的冷凍保存策略是添加二甲基亞砜(DMSO)作為凍存保護(hù)劑，但DMSO具有內(nèi)在毒性，應(yīng)用于人體將引起許多不良反應(yīng)。隨著細(xì)胞治療技術(shù)的不斷發(fā)展，有效的細(xì)胞保存方法是細(xì)胞治療行業(yè)領(lǐng)域不可或缺的支撐手段。因此，開發(fā)無毒高效的新型凍存保護(hù)劑意義重大。在一條完整的細(xì)胞治療產(chǎn)業(yè)鏈中，各環(huán)節(jié)針對細(xì)胞不僅需要進(jìn)行長期保存細(xì)胞，進(jìn)行超低溫凍存(－80℃或－196℃)，建立“生命銀行”細(xì)胞庫。而且在細(xì)胞運輸、檢測評價、藥物篩選等過程中需要將細(xì)胞置于低體溫下(1-35℃)短期保存細(xì)胞，進(jìn)行低體溫保存。現(xiàn)階段并沒有一種綜合方法可以實現(xiàn)在兩種條件下“一體化”的保存細(xì)胞。細(xì)胞被采集出來，分別需要低體溫條件下運輸、超低溫條件下長期保存，然后在使用時經(jīng)過多步清洗步驟去除凍存保護(hù)液，再更換低體溫保護(hù)方法運輸、檢測，最后投入細(xì)胞治療使用之中。這些冗雜的步驟，不僅加劇了細(xì)胞染菌的風(fēng)險和細(xì)胞數(shù)目的減少，同樣會對細(xì)胞造成傷害，從而增加細(xì)胞治療的潛在風(fēng)險。現(xiàn)階段缺少一種綜合方法可以實現(xiàn)在兩個條件下“一體化”的保存細(xì)胞，同時解決超低溫凍存條件下冰晶造成的冷凍損傷，和低體溫條件下細(xì)胞“失巢凋亡”是科學(xué)問題的關(guān)鍵，這對細(xì)胞保存領(lǐng)域有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺點，提供一種用于保存細(xì)胞的組合物。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種用于保存細(xì)胞的組合物，包括細(xì)胞內(nèi)凍存保護(hù)劑以及細(xì)胞外凍存保護(hù)劑；所述的細(xì)胞內(nèi)凍存保護(hù)劑為兩性離子分子；所述的細(xì)胞外凍存保護(hù)劑為兩性離子聚合物；所述的兩性離子聚合物為UCST功能單元與LCST功能單元的聚合物。

所述的兩性離子分子為甜菜堿、L-左旋肉堿、氧化三甲胺中的一種或者組合物。

所述的LCST功能單元為NIPAm、HPA、TEGA中的一種；所述的UCST功能單元為SBMA，DMAPS中的一種。

所述的兩性離子聚合物為UCST功能單元與LCST功能單元的質(zhì)量投料比為4：1-1:1。

所述的兩性離子聚合物為UCST功能單元與LCST功能單元的質(zhì)量投料比為1:1。

所述的兩性離子聚合物為poly(SBMA-co-NIPAm)，其中SBMA和NIPAm的質(zhì)量投料比為4：1-1:1。

所述的兩性離子聚合物為poly(SBMA-co-NIPAm)，其中SBMA和NIPAm的質(zhì)量投料比為1:1。

兩性離子分子與所述的兩性離子聚合物的質(zhì)量投料比為1:4-10。

兩性離子分子與所述的兩性離子聚合物的質(zhì)量投料比為1:10。