[發(fā)明專利]乙肝病毒表面抗原試劑盒及測(cè)定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010095327.7
• 申請(qǐng)日: 2020-02-17
• 公開（公告）號(hào): CN111141908A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李立和;張沖;丁弘;李明衛(wèi);崔喆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種乙肝病毒表面抗原試劑盒及測(cè)定方法，屬于免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，在乙肝表面抗原酶聯(lián)免疫吸附法試劑中，偶聯(lián)酶和微孔載體的單克隆抗體采用雞抗人單克隆IgG抗體，稀釋液為生理鹽水中加入葡萄球菌A蛋白，葡萄球菌A蛋白結(jié)合免疫球蛋白IgG分子中Fc段，而不與雞抗體球蛋白結(jié)合，采用雙抗體夾心法進(jìn)行檢測(cè)，葡萄球菌A蛋白不干擾檢測(cè)試劑中的抗體，能消除血清中異常球蛋白的干擾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫分析技術(shù)領(lǐng)域；或是利用可見光，通過(guò)測(cè)試反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生顏色變化來(lái)測(cè)試材料的方法，特別是涉及一種乙肝病毒表面抗原試劑盒及測(cè)定方法。

背景技術(shù)

乙肝病毒表面抗原是乙肝血清學(xué)5項(xiàng)檢查中的第一項(xiàng)，其英文縮寫是“HBsAg”，檢測(cè)乙肝的抗原有許多方法，如：放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、微粒子化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法、微粒子酶免檢測(cè)法、電化學(xué)發(fā)光法等，用不同的試劑檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果的數(shù)值各不相同，這些檢測(cè)HBsAg的方法都可歸為“定性”、“半定量”和“定量”三類。

乙肝病毒表面抗原測(cè)定原理為單克隆抗體（抗-HBS）吸附固相微孔載體表面，與血清中HBSAg結(jié)合，加入酶標(biāo)記的抗-HBS則形成新的復(fù)合物，酶促反應(yīng)對(duì)加入的底物產(chǎn)生顏色，酶標(biāo)儀可以測(cè)出OD值，與陰陽(yáng)性孔產(chǎn)生深淺對(duì)照判為陰性或陽(yáng)性，OD值分析：P（樣品）、N（空白或陰性），

P/N=待檢樣品OD-本底OD/陰性對(duì)照OD-本底OD

P/N≧2.1為陽(yáng)性。

在檢測(cè)試劑中，偶聯(lián)酶和微孔載體的單克隆抗體多為羊抗人IgG抗體，在測(cè)定多發(fā)性骨髓瘤患者時(shí)，血清中免疫球蛋白IgG、IgA異常升高，或者單克隆輕鏈明顯的升高，或在腎衰患者時(shí)，由于血液中異常蛋白的升高，造成非特異反應(yīng)增強(qiáng)，結(jié)果干擾大，甚至與臨床不符。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種消除血清中內(nèi)源性免疫球蛋白干擾，靈敏度高，特異性強(qiáng)的乙肝病毒表面抗原試劑盒及測(cè)定方法。

采用的技術(shù)方案是：在乙肝表面抗原酶聯(lián)免疫吸附法試劑中，偶聯(lián)酶和微孔載體的單克隆抗體采用雞抗人單克隆IgG抗體，稀釋液為生理鹽水中加入葡萄球菌A蛋白，葡萄球菌A蛋白結(jié)合人免疫球蛋白IgG分子中Fc段，而不與雞抗體球蛋白結(jié)合，葡萄球菌A蛋白不干擾檢測(cè)試劑中的抗體，能消除血清異常球蛋白的干擾，采用雙抗體夾心法進(jìn)行檢測(cè)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

試劑的制備：

一、乙肝病毒表面抗原試劑盒酶標(biāo)板的制備

將雞抗人單克隆IgG抗體用包被液稀釋成1∶200倍，加入100μL包被微孔反應(yīng)板的微孔，加入含1％小牛血清白蛋白磷酸鹽緩沖液350μL/每孔，室溫封閉2小時(shí)，4℃過(guò)夜，甩盡孔內(nèi)液體后，用洗滌液洗3次，每次3分鐘。

二、酶標(biāo)抗-HBs抗體的制備

1.取10mg HRP溶于0.2 mL 25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PBS將25%戊二醛稀釋為1.25%)，室溫(20℃左右)反應(yīng)結(jié)合18h。

2.用0.15mol/L NaCl平衡過(guò)的Sephadex G-50凝膠柱洗脫，除去游離的戊二醛，或用0.01mol/L，pH7.2PBS，4℃透析過(guò)夜。

3.將5mg雞抗人單克隆IgG抗體溶于1mL 0.15mol/L NaCl，再與醛化HRP溶液(10mg/mL)混合。

4.加入0.1mL 1mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液(調(diào)節(jié)pH至9.0~9.6)，4℃，電磁攪拌下結(jié)合24h。

5.加入0.1mL0.2mol/L賴氨酸(0.29g溶于10mL蒸餾水)，4℃放置2h，以封閉殘留的醛基，終止反應(yīng)。