[發明專利]一種復合微生物制劑及其培養方法與應用

在審

• 申請號: 202010093435.0
• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN111187739A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 莫艷華;姚康;馬國華;黃海紅
• 申請（專利權）人: 廣東中科無抗養殖科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N1/18;A01K67/02;A23K50/30;A23K10/18;C12R1/23;C12R1/25;C12R1/01;C12R1/125;C12R1/10;C12R1/38;C12R1/865;C12R1/72
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 江間開

1.一種復合微生物制劑的培養方法，其特征在于包含如下步驟：

(1)菌種活化培養：將冷凍保藏的嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌、啤酒酵母、產朊假絲酵母分別進行多次活化，得到嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌、啤酒酵母、產朊假絲酵母活化菌種；

(2)液體菌種培養

①將步驟(1)制得的嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌活化菌種等質量比接種至液體培養基中，37℃厭氧培養2～3天，得到混合乳酸菌種子液；

②將步驟(1)制得的兩歧雙歧桿菌活化菌種接種至液體培養基中，37℃厭氧培養2～3天，得到兩歧雙歧桿菌種子液；

③將步驟(1)制得的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌活化菌種等質量比接種至液體培養基中，搖床轉速150～200r/min、溫度30～35℃培養1-2天，得到混合芽孢桿菌種子液；

④將步驟(1)制得的沼澤紅假單胞菌活化菌種接種至液體培養基中，60℃鎢絲燈光照、30～35℃厭氧培養5～7天，得到沼澤紅假單胞菌種子液；

⑤將步驟(1)制得的啤酒酵母、產朊假絲酵母活化菌種等質量比接種至液體培養基中，搖床轉速150～200r/min、溫度28～30℃培養2天，得到混合酵母菌種子液；

(3)復合菌種培養：將步驟(2)制得的混合芽孢桿菌種子液和混合酵母菌種子液同時接種至發酵培養基1中，搖床轉速150～200r/min、溫度30℃、裝液量30mL/250mL培養1～2天，然后再將步驟(2)制得的混合乳酸菌種子液、兩歧雙歧桿菌種子液和沼澤紅假單胞菌種子液同時接種至上述發酵體系中，30～35℃下厭氧培養3～5天，得復合微生物制劑菌種，其中，混合乳酸菌種子液、兩歧雙歧桿菌種子液、混合芽孢桿菌種子液、沼澤紅假單胞菌種子液和混合酵母菌種子液的接種量比為5:4:3:3:5；總接種量為重量百分比10％；

(4)成品培養：將步驟(3)制得的復合微生物制劑菌種按重量百分比5～8％的接種量接種至發酵培養基2中，28～30℃密閉發酵7～15天，獲得復合微生物制劑的成品；其中，該步驟發酵培養基不用滅菌。

2.根據權利要求1所述的復合微生物制劑的培養方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌、啤酒酵母、產朊假絲酵母的菌株分別為：嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)CICC 6083、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)CICC 21790、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)CICC 6166、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CICC24434、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)CGMCC 1.10257、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudanonas palustris)CGMCC 1.8929、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC2.3973、產朊假絲酵母(Candida utilis)CGMCC 2.3047。

3.根據權利要求1所述的復合微生物制劑的培養方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的多次活化的具體操作為：將冷凍保藏的嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌、啤酒酵母、產朊假絲酵母菌株進行三次斜面活化，然后再進行平板純化培養，最后進行斜面培養，得到嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌、啤酒酵母、產朊假絲酵母菌種。

4.根據權利要求3所述的復合微生物制劑的培養方法，其特征在于：

所述的斜面活化、平板純化培養或斜面培養的條件為：

嗜酸乳桿菌或植物乳桿菌37℃兼性厭氧培養2～3天，

兩歧雙歧桿菌37℃厭氧培養3～5天，

枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌30℃好氧培養1～2天；

沼澤紅假單胞菌60瓦烏絲燈光照30～35℃厭氧培養5～7天；

啤酒酵母或產朊假絲酵母28～30℃好氧培養2天。