[發(fā)明專利]一種精子外源基因轉(zhuǎn)染方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010091805.7
• 申請(qǐng)日: 2020-02-13
• 公開（公告）號(hào): CN111206049A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢芳;張曉婷;李麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆維吾爾自治區(qū)生殖健康醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種精子外源基因轉(zhuǎn)染方法，包括以下步驟：A、將載體與外源基因進(jìn)行混合，制得載體與外源基因的復(fù)合物；B、將奶牛精子放入氯化鈣溶液中，緩慢攪拌15min；C、將步驟A制得的復(fù)合物放入步驟B的氯化鈣溶液中，進(jìn)行轉(zhuǎn)染1h；D、在步驟C的氯化鈣溶液中插入電擊管，進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)染3h。本發(fā)明可以解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種精子外源基因轉(zhuǎn)染方法。

背景技術(shù)

近年來基因重組技術(shù)快速發(fā)展，其中通過轉(zhuǎn)染方式進(jìn)行基因重組是一種常用的方法。傳統(tǒng)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)在形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的效率上較低，如何提高轉(zhuǎn)染效率成為了本領(lǐng)域亟待解決的技術(shù)問題之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種精子外源基因轉(zhuǎn)染方法，能夠解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的效率。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下。

一種精子外源基因轉(zhuǎn)染方法，步驟如下：

A、將載體與外源基因進(jìn)行混合，制得載體與外源基因的復(fù)合物；

B、將奶牛精子放入氯化鈣溶液中，緩慢攪拌15min；

C、將步驟A制得的復(fù)合物放入步驟B的氯化鈣溶液中，進(jìn)行轉(zhuǎn)染1h；

D、在步驟C的氯化鈣溶液中插入電擊管，進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)染3h。

作為優(yōu)選，步驟A中，載體包含有SEQ ID NO.1的核苷酸序列所表示的編碼基因。

作為優(yōu)選，步驟B中，氯化鈣溶液的濃度為7wt％。

作為優(yōu)選，步驟C中，復(fù)合物與奶牛精子的摩爾比為10∶1。

作為優(yōu)選，步驟D中，電擊管的電壓為180V。

采用上述技術(shù)方案所帶來的有益效果在于：

本發(fā)明通過使用高效率載體提高了轉(zhuǎn)染的靶向性，同時(shí)配合優(yōu)化后的轉(zhuǎn)染操作步驟，實(shí)現(xiàn)載體與細(xì)胞的快速融合，從而實(shí)現(xiàn)提高轉(zhuǎn)染效率的目的。

具體實(shí)施方式

一種精子外源基因轉(zhuǎn)染方法，步驟如下：

A、將載體與外源基因進(jìn)行混合，制得載體與外源基因的復(fù)合物；

B、將奶牛精子放入氯化鈣溶液中，緩慢攪拌15min；

C、將步驟A制得的復(fù)合物放入步驟B的氯化鈣溶液中，進(jìn)行轉(zhuǎn)染1h；

D、在步驟C的氯化鈣溶液中插入電擊管，進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)染3h。

步驟A中，載體包含有SEQ ID NO.1的核苷酸序列所表示的編碼基因。步驟B中，氯化鈣溶液的濃度為7wt％。步驟C中，復(fù)合物與奶牛精子的摩爾比為10∶1。步驟D中，電擊管的電壓為180V。

本發(fā)明可以將奶牛精子穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的效率至少提高15％。

上述描述僅作為本發(fā)明可實(shí)施的技術(shù)方案提出，不作為對(duì)其技術(shù)方案本身的單一限制條件。