[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）檢測試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010091765.6
• 申請日: 2020-02-13
• 公開（公告）號: CN111534633B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹華立;裘惠良
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州千基生物科技有限公司;杭州美聯(lián)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 萬尾甜;韓介梅

1.一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）檢測試劑盒，其特征在于，包括反應(yīng)液，陽性對照品，內(nèi)標(biāo)，陰性對照品；其中，所述的反應(yīng)液包括新型冠狀病毒檢測引物、熒光探針、PCR緩沖體系及酶，所述的陽性對照品包括新型冠狀病毒假病毒，所述的內(nèi)標(biāo)包括不含靶標(biāo)基因的外源性片段假病毒，所述的陰性對照品包括生理鹽水；該試劑盒用于同時檢測新型冠狀病毒（2019-nCOV）的：如SEQ ID NO:1所示的ORF1ab基因、如SEQ ID NO:2所示的N基因、和如SEQID NO:3所示的E基因；所述的檢測引物及熒光探針為：

ORF1ab F1：GAACCTCATCAGGAGATGC，即SEQ ID NO:5；

ORF1ab R1：ATCATTGAGAAATGTTTACGC，即SEQ ID NO:6；

ORF1ab P：CAAAATTGCCGATAAGTATG，即SEQ ID NO:7，5端標(biāo)記FAM，3端標(biāo)記BHQ1；

N F1：TGCTGAGGCTTCTAAGAAGC，即SEQ ID NO:8；

NR1：GATTAGTTCCTGGTCCCCAA，即SEQ ID NO:9；

N P：CATACAATGTAACACAAGCTTTCG，即SEQ ID NO:10，5端標(biāo)記ROX，3端標(biāo)記BHQ2；

E F1：TTATACTGAAAAATGGGAATC，即SEQ ID NO:11；

E R1：TAACATGTTCAACACCAGTGTC，即SEQ ID NO:12；

E P：TACACAGTTACTTCACTTCAGAC，即SEQ ID NO:13，5端標(biāo)記HEX，3端標(biāo)記BHQ1。

2.如權(quán)利要求1所述的一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）檢測試劑盒，其特征在于，所述的內(nèi)標(biāo)采用競爭性內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)序列為SEQ ID NO:4，檢測引物與新型冠狀病毒ORF1ab 基因檢測引物一致，及熒光探針：

ICP: TTTTGCTAATCATGTTCATACCTC，即SEQ ID NO:14，5端標(biāo)記CY5，3端標(biāo)記BHQ3。

3.如權(quán)利要求1所述的一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）檢測試劑盒，其特征在于，所述的新型冠狀病毒假病毒為外殼蛋白包裹由新型冠狀病毒（2019-nCOV）的ORF1ab基因、N基因、和E基因形成的假病毒顆粒；

所述的外殼蛋白為噬菌體MS2成熟酶和噬菌體MS2衣殼蛋白組成；

所述的假病毒顆粒中ORF1ab基因、N基因、和E基因的核苷酸序列即SEQ ID NO:1-3串聯(lián)。

4.如權(quán)利要求1所述的一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）檢測試劑盒，其特征在于，所述的內(nèi)標(biāo)，其不含靶標(biāo)基因的外源性片段假病毒為外殼蛋白包裹內(nèi)標(biāo)IC基因形成的假病毒顆粒；

所述的外殼蛋白為噬菌體MS2成熟酶和噬菌體MS2衣殼蛋白組成；

所述的內(nèi)標(biāo)IC基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:4。