[發明專利]一種免疫膠體金均相標記法

有效

• 申請號: 202010091697.3
• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN110940805B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 楊春江;袁志波;馬孝斌
• 申請（專利權）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種免疫膠體金均相標記法，具體包括下述步驟：步驟1)添加裸金并調節pH值；步驟2)添加抗體：在離心管中添加預定量的抗體混合液，抗體混合液中含有分散劑；步驟3)添加BSA：在離心管中添加預定量的BSA；步驟4)離心、棄上清、重懸復溶得到標記好的膠體金。本發明的免疫膠體金均相標記法極顯著的提升了標記效果的一致性，在生產實踐中，使用均相標記法將使免疫膠體金的標記效果一致性由20%提升至97%。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種免疫膠體金均相標記法。

背景技術

免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique)是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體檢測的免疫標記技術，英文縮寫為：GICT。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如抗壞血酸、枸櫞酸鈉等作用下，還原聚合成為特定大小的納米金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。

常規的免疫膠體金標記步驟是：1，調整pH值；2，添加結合物；3，封閉；4，添加穩定劑。因是直接添加結合物，故本司命名為直接標記法。在生產實踐中，直接標記法的標記效果一致性較差，通常為20%，結合物投料量大，通常5ug/ml，造成生產效率低下、生產成本高的缺陷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種免疫膠體金均相標記法，以解決上述問題。

本發明采用了如下技術方案：

一種免疫膠體金均相標記法，其特征在于，包括下述步驟：

步驟1)添加裸金并調節pH值；

步驟2)添加抗體：在離心管中添加預定量的抗體混合液，抗體混合液中含有分散劑；

步驟3)添加BSA：在離心管中添加預定量的BSA；

步驟4)離心、棄上清、重懸復溶得到標記好的膠體金。

進一步地，本發明的免疫膠體金均相標記法還具有這樣的特征：步驟1)中，添加預定量的K₂CO₃，調節pH值。

進一步地，本發明的免疫膠體金均相標記法還具有這樣的特征：在步驟3)和步驟4)之間，還包括添加PEG的步驟，在離心管中添加預定量的PEG，渦旋混勻。

進一步地，本發明的免疫膠體金均相標記法還具有這樣的特征：其中，所述分散劑為抗體分散劑或受體分散劑。抗體和受體是以蛋白分子量作為劃分的，抗體通常指分子量大于150kD，受體指小蛋白分子，通常分子量在20～30kD。

所述抗體分散劑AD的配方為：

BSA：0～30.0wt%，

PVP：0～30.0wt%，

PEG：0～30.0wt%，

余量為純化水，

其中，BSA、PVP、PEG的含量不同時為0wt%。

較佳地，抗體分散劑包含30重量份的牛血清白蛋白、30重量份的聚乙二醇以及40重量份的純化水。

較佳地，抗體分散劑包含30重量份的牛血清白蛋白、30重量份的聚乙烯吡咯烷酮以及40重量份的純化水。