[發明專利]一種免疫膠體金混合標記用C線抗體及其應用

有效

• 申請號: 202010091696.9
• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN111647080B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 楊春江;袁志波;馬孝斌
• 申請（專利權）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/558;C12R1/91
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本發明公開了一種免疫膠體金混合標記用C線抗體及其應用，屬于免疫膠體金技術領域。該C線抗體為牛血清白蛋白抗體；所述C線抗體的重鏈的氨基酸序列包括如序列表中SEQ ID NO：1所示的序列；所述C線抗體的輕鏈的氨基酸序列包括如序列表中SEQ ID NO：2所示的序列。該C線抗體可以和待標記樣品配制成樣品混合液進行免疫膠體金標記，其標記的pH為7.8~8.4。本發明通過將牛血清白蛋白抗體與待標記樣品進行混合，可以實現與真C線羊抗鼠的結合，從而可以增加T線與C線強弱的消長變換，以提高側向層析檢測的靈敏度和避免出現假陽性。

技術領域

本發明涉及免疫膠體金技術領域，具體是一種免疫膠體金混合標記用C線抗體及其應用。

背景技術

免疫膠體金技術（Immune colloidal gold technique）是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體檢測的免疫標記技術，英文縮寫為：GICT。膠體金是由氯金酸（HAuCl₄）在還原劑如抗壞血酸、枸櫞酸鈉等作用下，還原聚合成為特定大小的納米金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金顆粒帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。

側向層析技術是20世紀90年代在單克隆抗體技術、膠體金免疫層析技術和新材料技術基礎上發展起來的一項新型體外診斷技術，具有快速、簡便、單人份檢測、經濟的優點,現已廣泛應用于醫學檢測、食品質量監測、環境監測、農業和畜牧業、出入境檢驗檢疫、法醫定案等領域。

側向層析技術以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將特異性的抗原或抗體固定在NC膜上，當待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過毛細作用側向移動，與結合墊上的膠體金或微球標記的試劑發生特異的免疫反應，再移動到NC膜上，被固定在NC膜表面的抗原或抗體檢測線（T線）捕獲，聚集在檢測帶上，通過目測硝酸纖維素表面標記物（膠體金或乳膠顆粒）的光反射信號得到直觀的顯色結果。其它未結合的標記物則越過檢測帶，被質控線（C線）的抗體（通常是羊抗鼠）捕獲。通過T線和C線的有無和顏色深淺實現待測物的定性或半定量檢測。

抗體是免疫膠體金標記的主要標記物，抗體的空間結構呈Y字型，由兩條輕鏈和兩條重鏈組成。重鏈的氨基端與輕鏈組成與抗原結合的Fab段，兩條重鏈的羧基端由二硫鍵連接組成保守的Fc段。

在免疫膠體金標記過程，抗體與膠體金顆粒的結合構型，在空間上具有方向性。為了描述這種空間結合構型的方向性，筆者將抗體的Fab段定義為頭部（Head），Fc段定義為腳部（Foot）。這樣抗體分子與膠體金顆粒的空間結合構型有三種狀態：1，Fab段與膠體金顆粒結合態，頭朝下結合態，Head-on；2，Fc段與膠體金顆粒結合態，腳朝下結合態，Foot-on；3，側臥態，Side-on。在生產標記中發現，有一些抗體標記后，僅存在Foot-on結合態，或者Foot-on與Side-on結合混合態，而無Head-on結合態。在側向層析試紙條的測試結果判讀直觀表現就是，T線顯色強度良好，抑制率良好，但抗體C線顯色非常弱，或不顯色。

很多抗生素、農藥、毒品的單克隆抗體很難篩選，使用受體蛋白檢測，受體蛋白沒有Fc段，不能夠與抗體結合。

目前的解決方法是應用牛血清白蛋白（BSA）封閉膠體金顆粒混合化學染料在NC膜上劃假C線。假C線的顯色強度是恒定的，無T線與C線強弱的消長變換，這就喪失了一部分的靈敏度。另外假C線與膠體金標記物的活性無關，與免疫金的活性狀態不同步，不能指示免疫金的活性狀態，在質量控制上容易造成假陽性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種免疫膠體金混合標記用C線抗體，以解決上述背景技術中提出的問題。