[發(fā)明專利]一種測定血液中苯巴比妥的方法、試劑盒及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010091510.X
• 申請日: 2020-02-08
• 公開（公告）號: CN111239282B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設計）人: 金米聰;陳曉紅;林夢;周健;俞建成
• 申請（專利權）人: 寧波市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張雪

本發(fā)明公開了一種測定血液中苯巴比妥的方法、試劑盒及應用，屬于血藥濃度測定技術領域，該方法采用HPLC?MS/MS測定血液樣品中苯巴比妥含量，具體包括以下步驟：(1)血液樣品預處理；(2)標準工作液的配制；(3)HPLC?MS/MS檢測；本發(fā)明采用分散固相萃取法，以PSA和PLS為分散固相萃取劑除去血漿中的雜質(zhì)，無水硫酸鎂和無水硫酸鈉除去血漿中的水分，降低基質(zhì)對測定的影響，通過優(yōu)化分散固相萃取樣品預處理條件和LC/MS?MS檢測條件，建立快速、準確、綠色的分散固相萃取?液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿樣品中苯巴比妥藥物的新方法，并取得了較為滿意的結果。

技術領域

本發(fā)明涉及血藥濃度測定技術領域，特別是涉及一種測定血液中苯巴比妥的方法、試劑盒及應用。

背景技術

鎮(zhèn)靜類藥物是臨床常用藥物，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，主要用于失眠、焦慮、緊張、恐懼、癲癇病和術前鎮(zhèn)靜等。鎮(zhèn)靜類藥物通常分為苯二氮卓類(艾司唑侖、咪達唑侖、阿普唑侖、三唑侖、地西泮、氯硝西泮、勞拉西泮、硝西泮、奧沙西泮、氯氮卓等)、巴比妥類(巴比妥、苯巴比妥、異戊巴比妥等)、吩噻嗪類(氯丙嗪、異丙嗪等)、喹唑酮類(安眠酮等)和咪唑并吡啶類(唑吡坦等)等。研究實踐顯示，巴比妥類藥物具有成癮性，且其治療劑量與中毒劑量較為接近，因此在臨床上已逐漸被苯二氮卓類藥物取代。但由于其應用廣泛，較易獲得，因此易被吸毒人員或犯罪分子不法使用，甚者導致自殺、他殺、過量服用中毒等刑事案件的發(fā)生。因此，巴比妥類藥物在涉毒案例的鑒定中有著較高的檢出率，尤其是苯巴比妥。生物檢材中巴比妥類藥物的定性和定量分析在臨床毒物分析及法醫(yī)毒物分析領域中也見有較多的應用與報道。

目前關于鎮(zhèn)靜類藥物的檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、液相色譜-高分辨質(zhì)譜法(LC-HRMS)等，主要研究血液、尿液、毛發(fā)等生物樣品。HPLC法一般用保留時間定性，該方法雖然方便，但某些物質(zhì)保留時間相同，故難以用于復雜樣品的檢測，且分析速度較慢。GC-MS法對藥物的熱穩(wěn)定性要求較高，多數(shù)須經(jīng)過衍生化，局限性大，樣品預處理費時費力。對于樣品預處理而言，目前主要有液液萃取法(LLE)、固相萃取法(SPE)、柱切換法和分散固相萃取法(d-SPE)等。其中液液萃取法和固相萃取法較為普及，但液液萃取法有機試劑使用量大，污染環(huán)境，固相萃取法所使用的固相萃取小、柱成本高，且選擇空間少。柱切換法目前預處理柱填料比較單一，使用有局限性。

目前已見有公開報道的血液中巴比妥類藥物的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定技術(LC/MS-MS)，然而，經(jīng)實踐證實，所述的報道的方法均存在靈敏度偏低，生物檢材用量大，分析時間長等缺點，因此難以滿足臨床上及司法鑒定中對于此類藥物的檢測，要求靈敏、簡單、快速、準確的分析需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種測定血液中苯巴比妥的方法、試劑盒及應用，以解決上述現(xiàn)有技術存在的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

本發(fā)明提供一種測定血液中苯巴比妥的方法，采用HPLC-MS/MS測定血液樣品中苯巴比妥含量，具體包括以下步驟：

(1)血液樣品預處理：以PSA和/或PLS為分散固相萃取劑除去血漿中的雜質(zhì)，無水硫酸鎂和/或無水硫酸鈉除去血漿中的水分；

(2)標準工作液的配制；

(3)HPLC-MS/MS檢測：液相色譜采用乙腈-甲酸水溶液作為流動相；質(zhì)譜采用負離子電噴霧離子化的多離子反應監(jiān)測。

進一步地，所述血液樣品為血漿或血清。

進一步地，所述血液樣品預處理的方法為：