[發明專利]用于蛋白質或多肽的混合物的從上到下多路復用質譜分析的方法

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• 申請號: 202010090620.4
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN111257404A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: P·F·易;J·L·小斯蒂芬森;J·E·P·賽卡
• 申請（專利權）人: 薩默費尼根有限公司
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;楊昀

1.一種識別微生物種類在樣本中存在或不存在的方法，其包括：

(a)識別一系列同時存在于所述樣品中以診斷所述微生物種類存在于所述樣品中的分析物化合物，所述系列的分析物化合物包括蛋白質化合物、多肽化合物，或蛋白質和多肽化合物兩者；

(b)從所述樣本提取包括源于樣本的蛋白質和多肽的混合物的液體溶液；

(c)將所述液體溶液的至少第一部分引入到質譜儀的電離源中；

(d)從所述電離源處的所述液體溶液的所述至少第一部分產生所述化合物混合物的帶正電離子，所述帶正電離子包括多個離子類型；

(e)分離所述多個離子物質的至少第一子集，至少第一分離的子集的每個分離的子集包括相應質荷比(m/z)比率范圍；

(f)通過使離子物質的每一所述分離的子集在預定持續時間中與反應劑陰離子反應而從離子物質的每一分離的子集產生多個第一代產物離子物質，所述反應劑陰離子在反應后從離子物質的所述分離的子集的一或多個離子物質中的包括蛋白質或多肽化合物的質子化分子物質的每一者提取質子；

(g)使用所述質譜儀的質量分析器產生第一代產物離子物質或由所述第一代產物離子物質的進一步反應產生的第二代產物離子物質的至少一個質譜；

(h)對于所述系列中的每一相應分析物化合物，執行以下步驟：

(h1)對于作為所述相應分析物化合物的診斷的一或多個m/z比的集合執行所述第一代或所述第二代產物離子物質的所述至少一個質譜的搜索；和

(h2)如果在所述質譜中識別出一或多個m/z比的所述集合，那么識別所述液體溶液內的所述相應分析物化合物的存在；和

(i)如果在所述液體溶液內識別出所述系列分析物化合物中的每種分析物化合物的存在，那么識別所述微生物種類存在于所述樣本中。

2.根據權利要求1所述的方法，其中執行所述步驟(h1)和(h2)是與執行所述步驟(c)到(g)中的一或多個同時進行。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物種類被限定為特定細菌種類，且所述系列分析物化合物包含作為所述特定細菌種類的診斷的足夠數目的分析物化合物，以識別所述特定細菌種類存在或不存在于所述樣本中。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物種類被限定為特定細菌種類，且所述系列分析物化合物包含作為所述特定細菌種類的診斷的足夠數目的分析物化合物，以識別所述特定細菌種類存在或不存在于實現所述樣本中。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物種類被限定為特定細菌亞種類，且所述系列分析物化合物包含作為所述特定細菌亞種類的診斷的足夠數目的分析物化合物，以識別所述特定細菌亞種類存在或不存在于所述樣本中。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物種類被限定為特定病毒菌株，且所述系列分析物化合物包含作為所述特定病毒菌株的診斷的足夠數目的分析物化合物，以識別所述特定病毒菌株存在或不存在于所述樣本中。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物種類被限定為特定病毒菌株，且所述系列分析物化合物包含作為所述特定病毒菌株的診斷的足夠數目的分析物化合物，以識別所述特定病毒菌株存在或不存在于所述樣本中。

8.一種識別微生物種類樣本中的的存在或不存在的方法，其包括：

(a)識別在所述樣本中的同時存在是所述樣本中的所述微生物種類的存在的診斷的系列分析物化合物，所述系列分析物化合物包括蛋白質化合物、多肽化合物，或蛋白質和多肽化合物兩者；

(b)從所述樣本提取包括源于樣本的蛋白質和多肽的混合物的液體溶液；

(c)對于所述系列中的每一相應分析物化合物，執行以下步驟：

(c1)將所述液體溶液的一部分引入到質譜儀的電噴射電離源中；

(c2)通過電噴射電離形成所述液體溶液的所述部分的所述化合物混合物的帶正電離子，所述帶正電離子包括多個離子類型；

(c3)分離包括第一質荷比(m/z)比率范圍的所述離子物質的第一子集，所述范圍包含所述相應分析化合物的特定預定多質子化分子物質的m/z比；

(c4)通過使離子物質的所述分離的第一子集在預定持續時間中與反應劑陰離子反應而從離子物質的所述分離的第一子集產生多個第一代產物離子物質，所述反應劑陰離子在反應后從一或多個離子物質中的包括蛋白質或多肽化合物的質子化分子物質的每一者提取質子；

(c5)使用質量分析器產生所述第一代產物離子物質或從所述第一代產物離子物質產生的第二代產物離子物質的質譜；

(c6)對于作為所述相應分析物化合物的診斷的一或多個m/z比的集合執行所述第一代或所述第二代產物離子物質的所述質譜的搜索；和

(c7)如果在所述質譜中識別出一或多個m/z比的所述集合，那么識別所述液體溶液內的所述相應分析物化合物的存在；和

(d)如果在所述液體溶液內識別出所述系列分析物化合物中的每種分析物化合物的存在，那么識別所述微生物種類存在于所述樣本中。