[發明專利]響應ONOO-

在審

• 申請號: 202010089410.3
• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111362900A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 尤進茂;陸姣;李贊;譚江坤;孫志偉;常芮
• 申請（專利權）人: 曲阜師范大學
• 主分類號: C07D311/82
• 分類號: C07D311/82;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 崔建章

本發明針對提供響應ONOO?的比率型小分子熒光探針及其制備方法和應用，屬于熒光探針檢測領域，制備得到的分子探針能應用于生物樣本檢測比率型的探針分子，以9?(2?羧苯基)?6?(二乙氨基)?1,2,3,4?四氫夾氧雜蒽為熒光基團，以活化的C＝C雙鍵為反應活性基團，熒光探針F₅₃₃具有標記反應迅速、對ONOO^?選擇性高、檢測限極低、合成方法簡便。在生物樣本成像中受外界條件的影響小，結果準確。該小分子熒光探針對于進一步了解ONOO^?在機體內的作用機理有著深遠意義。

技術領域

本發明屬于熒光探針檢測領域，尤其涉及響應ONOO^-的比率型小分子熒光探針及其制備方法和應用。

背景技術

體內活性氧(簡稱ROS)的過量產生被認為是多種病理的關鍵因素，ONOO^-是生物體系中極強的氧化劑，可以與一系列的分子靶點反應，包括蛋白質，脂質和核酸，可破壞分子，引起細胞內膜結構破壞，最終導致一系列疾病，如糖尿病，阿茨海默癥，癌癥，關節炎，自身免疫性疾病等，因此發明一種探針，完成對ONOO^-的即時檢測非常重要。

到目前為止，高效液相色譜-質譜、電化學分析、毛細管電泳分析、以及以有機探針和納米材料為基礎的拉曼分析法用來檢測生物小分子被廣泛應用。然而現有大多分析方法誤差高，僅能進行定性檢測，對于小微劑量的ONOO^-難于準確識別并檢測。

相較于這些現有分析方法，熒光探針具有高靈敏性，即時檢測以及可應用于生命有機體系等獨特優勢。此外，相較于開關型熒光有機探針的高誤差，本發明比率型熒光探針能有效避免來自外界環境或儀器設備的影響。

發明內容

基于上述現有問題，本發明針對提供一種響應ONOO^-的比率型小分子熒光探針及其制備方法，制備得到的分子探針能應用于生物樣本檢測比率型的探針分子，以9-(2-羧苯基)-6-(二乙氨基)-1,2,3,4-四氫夾氧雜蒽為熒光基團，以活化的C＝C雙鍵為反應活性基團，熒光探針F₅₃₃具有標記反應迅速、對ONOO^-選擇性高、檢測限極低、合成方法簡便。該小分子熒光探針的設計與合成對于進一步了解ONOO^-在機體內的作用機理有著深遠意義。

具體發明技術方案如下：

響應ONOO^-的比率型小分子熒光探針，以9-(2-羧苯基)-6-(二乙氨基)-1,2,3,4-四氫夾氧雜蒽為熒光基團，以活化的C＝C雙鍵為反應活性基團；該分子探針優選為3-[(4-異丙苯基) 亞丙烯基烯]-7-(戊烷-3-烯丙基苯)-10-鄰甲苯基-1,2,3,4-四氫夾氧雜蒽，其化學結構式為：

本發明還提供一種上述檢測ONOO^-的比率型小分子熒光探針的制備方法：優選包括如下步驟：

1)將濃硫酸置入容器，再加入環己酮和2-[4-(二乙氨基)-2-羥基-苯甲酰]苯甲酸，攪拌加熱回流，反應結束，待溶液冷卻到室溫，倒入冰水中，攪拌均勻，然后向混合液體中滴加高氯酸，析出固體，得到中間產物F₃₇₆，結構為9-(2-羧苯基)-6-(二乙氨基)-1,2,3,4-四氫夾氧雜蒽；

2)將中間產物F₃₇₆，用無水乙醇溶解，加入4-二甲氨基肉桂醛，室溫攪拌反應完全后，將濾液旋干，通過層析柱方法得到目標產物：分子探針F₅₃₃，結構為3-[(4-異丙苯基)亞丙烯基烯]-7-(戊烷-3-烯丙基苯)-10-鄰甲苯基-1,2,3,4-四氫夾氧雜蒽。

上述檢測ONOO^-的小分子熒光探針的制備方法，具體各優選工藝為：

在步驟(1)中