[發明專利]TSBP輔助基團及基團輔助的腦啡肽及其衍生物的液相全合成方法

在審

• 申請號: 202010089302.6
• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111269261A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 欽傳光;李海迪;張子鑫;王馨蕊
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C07F9/12
• 分類號: C07F9/12;C07K14/70;C07K1/06
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種涉及磷酸三[4-(α-取代芐基)苯基]酯TSBP輔助基團，其特征在于：分子結構通式為

2.一種采用權利要求所述TSBP輔助基團進行基團輔助的腦啡肽及其衍生物液相的合成方法，其特征在于步驟如下：

步驟1、輔助基團與氨基酸的偶聯：輔助基團在脫水偶聯劑的作用下與氨基酸在0～50℃下攪拌反應1～3小時；氨酸Fmoc-Xaa-OH的C-端與TSBP輔助基團連接，生成中間體化合物1，(Fmoc-Xaa)₃-TSBP；

所述氨基酸與TSBP輔助基團的摩爾比為1～3:1；所述脫水偶聯劑為1︰1摩爾比的脫水偶聯活化劑和堿性物質；

所述輔助基團為磷酰氧基苯甲醇TSBP；

所述氨基酸采用芴甲氧羰基Fmoc保護的某氨酸Fmoc-Xaa-OH；

步驟2、分離純化：向生成物A加入極性小的烷烴或醚類溶劑，借助TSBP輔助基團在溶劑系統中易結晶沉淀的特性，將生成物1與其他雜質分離；

對分離后的生成物1進行過濾和洗滌或重結晶操作得到純化的生成物1；

步驟3、脫除N-端Fmoc：將純化的生成物1采用脫Fmoc試劑處理，在10～50℃下攪拌反應0.5～2小時得到生成物2，(H₂N-Xaa)₃-TSBP；

向生成物2加入極性小的烷烴或醚類溶劑，借助TSBP輔助基團在溶劑系統中易結晶沉淀的特性，將生成物2與其他雜質分離；

對分離后的生成物2進行過濾和洗滌或重結晶操作得到純化的生成物2；

步驟4：以純化的含有輔助基團TSBP的生成物2作為原料，替代步驟1的輔助基團，以芴甲氧羰基Fmoc保護的苯丙氨酸Fmoc-Phe-OH替代步驟1的氨基酸進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到化合物(H₂N-Phe-Xaa)₃-TSBP；

以第一次循環重復后純化的生成物(H₂N-Phe-Xaa)₃-TSBP作為原料，替代步驟1的輔助基團，以芴甲氧羰基(Fmoc)保護的甘氨酸Fmoc-Gly-OH替代步驟1的氨基酸進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到化合物(H₂N-Gly-Phe-Xaa)₃-TSBP；

以第二次循環重復后純化的生成物(H₂N-Gly-Phe-Xaa)₃-TSBP作為原料，替代步驟1的輔助基團，以芴甲氧羰基(Fmoc)保護的甘氨酸Fmoc-Gly-OH替代步驟1的氨基酸進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到化合物(H₂N-Gly-Gly-Phe-Xaa)₃-TSBP；

以第三次循環重復后純化的生成物(H₂N-Gly-Gly-Phe-Xaa)₃-TSBP作為原料，替代步驟1的輔助基團，以芴甲氧羰基(Fmoc)保護的酪氨酸Fmoc-Tyr(OtBu)-OH替代步驟1的氨基酸進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到腦啡肽或其衍生物的前體化合物[H₂N-Tyr(OtBu)-Gly-Gly-Phe-Xaa]₃-TSBP；

步驟5、側鏈脫保護與TSBP輔助基團的剪除：以三氟乙酸的雞尾酒溶液為側鏈脫保護劑，分離純化腦啡肽或其衍生物的前體化合物[H₂N-Tyr(OtBu)-Gly-Gly-Phe-Xaa]₃-TSBP的混合液；反應條件為5～30℃下，攪拌1～3小時，脫除側鏈上的保護基團tBu、Boc和Pbf，同時剪除TSBP輔助基團，經分離純化得到腦啡肽或其衍生物的三氟乙酸鹽，[TFA*H-Try-Gly-Gly-Phe-Xaa-ZH]；所述三氟乙酸的雞尾酒溶液中的組分比例為：TFA/TIPS/H₂O＝95:2.5:2.5；

步驟6、腦啡肽及其衍生物的分離純化：對步驟5得到混合液通過旋蒸去除三氟乙酸鹽，再用乙酸乙酯萃取，沉淀析出，經過濾、乙酸乙酯洗滌、干燥得到純化的腦啡肽或其衍生物，[H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Xaa-ZH]。