[發明專利]一種肺腺癌腫瘤標記物蛋白及其應用

有效

• 申請號: 202010089234.3
• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111273023B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 馮華;鞏丹慧;任春慧;劉鶴;馮晨;溫宏麗
• 申請（專利權）人: 牡丹江醫學院
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;G01N33/68
• 代理公司: 北京辰權知識產權代理有限公司 11619
• 代理人: 董李欣

本發明涉及一種可以用于檢測早期肺腺癌的腫瘤標記物蛋白LAC?M及其應用。所述LAC?M蛋白是通過捕獲正常人與肺腺癌患者血清蛋白多肽圖譜，并將兩者進行比較，篩選得到對肺腺癌具備高度特異性的腫瘤標記物。同時，本發明涉及一種基于所述LAC?M標記物的Elisa檢測方法及其試劑盒，所述檢測方法具備較高的特異性，能夠快速進行肺腺癌的血清學檢測。

技術領域

本發明屬于腫瘤領域，特別涉及一種用于檢測肺腺癌的腫瘤標記物蛋白的篩選、及其檢測應用。

背景技術

肺癌是全球范圍內發病率及死亡率最高的癌種。肺癌按病理類型可以分為小細胞肺癌(small lung cancer,SCLC)和非小細胞肺癌(non-small lung cancer,NSCLC)；非小細胞肺癌約占肺癌種類的85％，而小細胞肺癌約占15％；其中NSCLC又分為鱗癌、腺癌、大細胞癌、肉瘤樣癌等，其中，肺腺癌占到肺癌中的約50，是最為常見的肺癌類型。研究發現，不吸煙女性肺癌患者多數為肺腺癌類型。

肺腺癌大多數起源于較小的支氣管黏膜分泌粘液的上皮細胞，因此大多數腺癌位于肺的周圍部分，呈球形腫塊，靠近胸膜。女性病人較為多見，發病年齡亦較小。肺腺癌與吸煙無密切關系，一部分病例癌腫發生在肺纖維疤痕病變的基礎上。腺癌在早期一般沒有明顯的臨床癥狀，往往在胸部X線檢查時才發現，因此通過一定檢測手段篩查出易患肺腺癌的高危人群，指導這類人群提早預防肺腺癌的發生至關重要。

肺腺癌的預后較差，5年生存率僅15％，這主要是由于晚期診斷和對轉移性疾病有限的治療手段有關。目前對于肺腺癌的早期檢測受到如下幾個因素的阻礙：第一，在疾病的早期沒有特定的臨床癥狀；第二，肺腺癌患者的年齡較大，侵略性治療干預受限，患者接受度差；第三，低劑量螺旋CT假陽性率高并且昂貴，不適合廣泛的篩查。此外，輻射暴露可能增加肺癌風險。目前尚缺乏靈敏度和特異度均滿意的用于肺腺癌診治相關的生物標志物。

隨著后基因組時代的到來，蛋白質組研究越來越受到國內外科技工作者的關注，蛋白質組是指“一個細胞或一個組織基因組所表達的全部蛋白質”。從蛋白質組學角度看腫瘤是一種蛋白質缺陷病，其發生過程中有許多蛋白質發生了異常變化，從而導致腫瘤組織表達的蛋白質圖譜的變化。腫瘤蛋白質組學研究主要是為了建立腫瘤細胞和組織的蛋白質表達譜及研究腫瘤細胞和組織與正常細胞和組織之間差異表達的蛋白質，以期發現用于腫瘤診斷、預后和治療的分子標志物。

目前肺癌特別是肺腺癌相關血清標志物特異性、敏感度低，因此臨床醫學亟待尋找正確率、靈敏度、特異度高的新的肺腺癌相關血清標志物。

發明內容

本發明的目的是提供一種能夠用于早期肺癌特別是肺腺癌的蛋白標志物及其在肺腺癌早期診斷中的應用。為實現上述目的，本申請發明人通過捕獲正常人與肺腺癌患者血清蛋白多肽圖譜，并且采用ClinProTools2.1軟件對比分析血清蛋白多肽譜圖差異，找出組間顯著差異表達的蛋白多肽分值，篩選出在肺腺癌患者血清中顯著高表達的蛋白多肽峰值中篩出肺腺癌血清腫瘤標志物。

本發明使用的多肽譜圖捕獲技術是質譜技術，是當前在蛋白質組學研究中最廣泛使用的蛋白質分析方法。由質譜技術發展而來的蛋白質指紋圖譜SELDI-TOE-MS技術，即表面增強激光解析電離飛行時間質譜，是一種包含層析與質譜的特殊蛋白質芯片技術，它綜合了芯片微陣列與質譜技術兩者的優點。

SELDI-TOF-MS包括蛋白質芯片、飛行質譜儀和分析軟件三部分。其原理是利用高能激光束使芯片中的分析物解析形成離子，根據不同質荷比，這些離子在儀器場中飛行的時間長短不一，由此繪制出一張質譜圖。經電腦處理后，直接顯示樣品中各種蛋白質的分子量、含量等信息。同時還可將它與正常人或某種疾病患者的圖譜，甚至數據庫中的圖譜進行對照，從而發現和捕獲新的疾病特異性相關蛋白及其特征。采用這種高靈敏度的蛋白質指紋圖譜技術尋找高特異性和高敏感性的腫瘤標志物已成為當前臨床醫學研究的熱點之一。