[發(fā)明專利]靶向人源化CD30的嵌合抗原受體及其用途

在審

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• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111254157A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王恩秀;汪晨;張海
• 申請（專利權(quán)）人: 南京艾德免疫治療研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02;A61P35/04
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 劉紅陽

本發(fā)明涉及一種靶向人源化CD30的嵌合抗原受體及其用途。具體而言，本發(fā)明提供一種核酸序列，選自：含有依次連接的人DAP12的編碼序列、T2A的編碼序列、人源化CD30單鏈抗體的編碼序列、人TREM1跨膜和胞內(nèi)區(qū)的編碼序列。本發(fā)明還提供相關(guān)的融合蛋白、含所述編碼序列的載體，以及所述融合蛋白、編碼序列、載體的用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于嵌合抗原受體領(lǐng)域，具體涉及靶向CD30的嵌合抗原受體及其用途。

背景技術(shù)

CD30是腫瘤壞死因子受體超家族的成員之一，屬于I型跨膜糖蛋白。CD30常低水平的表達于活化的T、B、NK細胞表面，在受到病毒(EBV、HCV、HIV)感染的淋巴細胞中也有表達，在霍奇金淋巴瘤和間變大細胞淋巴瘤(ALCL)等疾病中常常過表達。研究顯示CD30在DLBCL中表達陽性率約為14-37％，而在EBV相關(guān)的DLBCL中其陽性率為90％，CD30與B細胞活化、T細胞免疫激活以及細胞的增殖與凋亡等密切相關(guān)。CD30胞內(nèi)部分可與TRAF家族多個成員相互作用，既能通過JNK和p38信號通路介導細胞的凋亡，又能通過NFκB信號通路介導細胞的活化。由于CD30普遍表達于HL、ALCL以及DLBCL等淋巴瘤細胞表面，目前以CD30為靶點的免疫相關(guān)療法是淋巴瘤治療研究的熱點。

隨著腫瘤免疫學理論和臨床技術(shù)的發(fā)展，嵌合抗原受體T細胞療法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成為目前最有發(fā)展前景的腫瘤免疫療法之一[Schmitz M，et al.Chimeric antigen receptor-engineered T cellsforimmunotherapy of Cancer.J Biomed Biotechnol，2010，doi：10.1155/2010/956304.]。嵌合抗原受體(CAR)是CAR-T的核心部件，CAR能針對所選擇的免疫細胞重定向其特異性和反應(yīng)性，因此賦予T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，這使得經(jīng)過CAR改造的T細胞相較與正常T細胞受體(TCR)應(yīng)答不同，不受MHC限制，具有活化和增殖的能力，因此具有高效的殺傷腫瘤細胞的能力。

嵌合抗原受體(CAR)在T細胞上表達合成蛋白，其將抗體的抗原識別片段(如抗體單鏈可變區(qū)片段)與胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域融合。研究發(fā)現(xiàn)，以腫瘤特異性單克隆抗體的單鏈可變區(qū)(scFv)取代TCR的α，β鏈可變區(qū)，并將scFv直接和T細胞信號傳導結(jié)構(gòu)域連接，形成嵌合抗原受體(CAR)表達于T細胞表面，可通過scFv識別腫瘤特異性抗原，直接產(chǎn)生T細胞的活化信號，促進T細胞活化、增殖，特異性殺傷腫瘤細胞。該過程主要依賴CAR-T細胞表面的scFv對腫瘤抗原的特異性識別，免疫反應(yīng)的特異性和殺傷性較強。

本發(fā)明對構(gòu)建的靶向CD30的新型CAR，本發(fā)明采用的是人源化CD30(huSGN-35)單鏈抗體，huSGN-35具有高親和力。huSGN-35是靶向CD30的人源化形式的單克隆抗體，對腫瘤具有治療和診斷作用。本發(fā)明對CAR-T細胞進行了修飾，針對CD30靶點發(fā)揮CAR-T細胞抗腫瘤作用。本發(fā)明為臨床實驗和臨床治療奠定良好的基礎(chǔ)。

隨著CAR-T細胞治療經(jīng)驗的積累和不斷完善，其在惡性腫瘤中的應(yīng)用越來越受到各界關(guān)注。在此環(huán)境下，我們要加快步伐，利用自身已有的工作基礎(chǔ)、研發(fā)團隊、醫(yī)療團隊申請開展臨床試驗，推動CAR-T細胞治療在治療惡性腫瘤的道路上快速前進。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明第一方面提供一種核酸序列，所述核酸序列選自：

(1)含有依次連接的人自然殺傷激活受體相關(guān)蛋白(DAP12)的編碼序列、T2A的編碼序列、抗CD30單鏈抗體的編碼序列、人髓樣觸發(fā)受體(TREM1)跨膜和胞內(nèi)區(qū)的編碼序列。