[發(fā)明專利]固體支持物包被MPO的方法及其產(chǎn)品與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010088367.9
• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111269317B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張鵬飛;陳杰;王國磊
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海麗珠試劑股份有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C07K17/08;C07K17/14;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/573
• 代理公司: 北京超成律師事務(wù)所 11646
• 代理人: 高玉光

本發(fā)明涉及免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，提供了一種固體支持物包被MPO的方法及其產(chǎn)品與應(yīng)用。本發(fā)明提供一種固體支持物包被MPO的方法，在硼酸鹽緩沖液的環(huán)境中，將MPO包被在固體支持物上，得到包被產(chǎn)物。發(fā)明人針對MPO這一抗原進(jìn)行研究，提供本發(fā)明的包被方法，同時發(fā)現(xiàn)不同的包被環(huán)境，包被效果并不相同，現(xiàn)有技術(shù)中多數(shù)采用的緩沖液主要適用于抗體的包被，對于MPO的包被效率并不高。在硼酸鹽緩沖液作為包被環(huán)境時，固體支持物包被MPO效率高，得到的包被產(chǎn)物反應(yīng)性能好，精密度高，同時穩(wěn)定性得到顯著提高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種固體支持物包被MPO的方法及其產(chǎn)品與應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)相關(guān)血管炎(AAV)是一類累及腎、肺等多器官的自身免疫性小血管炎。該類疾病臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣但無特異性，易漏診和誤診，約1/3的患者的診斷延遲超過6個月；同時AAV病情進(jìn)展快且兇險，未經(jīng)治療的患者1年病死率高達(dá)80％；而經(jīng)過治療后，患者5年存活率約75％。因此AAV的準(zhǔn)確診斷對臨床極為重要。ANCA作為AAV的血清學(xué)標(biāo)志物，在AAV的診斷中發(fā)揮著不可替代的作用，并被中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕學(xué)分會納入診斷和治療指南。ANCA中陽性率最高的是抗髓過氧化物酶(MPO)抗體和抗蛋白酶3(PR3)抗體。而在我國，ANCA陽性患者抗MPO抗體陽性率明顯高于抗PR3抗體(5.1-7.5倍)。另外，抗MPO抗體陽性患者起病更急、腎損傷更快、急性期死亡率更高且慢性化病變較嚴(yán)重。因此，抗MPO抗體的準(zhǔn)確檢測在我國有重要意義。

然而，目前的MPO抗體檢測效果較差，靈敏度和準(zhǔn)確性都有待提高，主要原因在于檢測的試劑性能較差，固體支持物包被MPO的效果較低。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種固體支持物包被MPO的方法。

本發(fā)明的第二目的在于提供上述方法得到的包被產(chǎn)物。

本發(fā)明的第三目的在于提供上述包被產(chǎn)物的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種固體支持物包被MPO的方法，在硼酸鹽緩沖液的環(huán)境中，將MPO包被在固體支持物上，得到包被產(chǎn)物。

進(jìn)一步地，所述MPO為不含有heme的重組MPO。

進(jìn)一步地，所述硼酸鹽緩沖液的pH為8.0-9.0。

進(jìn)一步地，所述硼酸鹽緩沖液的濃度為100-200mmol/L；

優(yōu)選地，所述包被產(chǎn)物的保存液包括PBST、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、3-嗎啉丙磺酸緩沖液、三乙醇胺緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸溶液中的一種或多種。

進(jìn)一步地，固體支持物的材質(zhì)包括塑料、磁性金屬或玻璃；

優(yōu)選地，固體支持物的構(gòu)型包括微粒、珠子、試管、膜、微孔滴定板或芯片；

優(yōu)選地，固體支持物包括磁性微粒、微孔滴定板、硝酸纖維素膜或聚苯乙烯膠乳，例如羧基磁珠；

優(yōu)選地，磁性微粒與MPO的比例為(40-60個)：(10-25ng)。

進(jìn)一步地，對固體支持物進(jìn)行活化后，再將MPO包被在固體支持物上。

進(jìn)一步地，將MPO包被在固體支持物上后，還包括封閉的步驟，再得到包被產(chǎn)物；

優(yōu)選地，所述封閉用封閉蛋白為BSA、脫脂奶粉、酪蛋白或小牛血清；

優(yōu)選地，所述封閉用緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、3-嗎啉丙磺酸緩沖液、三乙醇胺緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸溶液。

上述方法得到的包被產(chǎn)物。