[發明專利]辣椒斑駁病毒的重組蛋白及其制備方法、多克隆抗體及制備方法、檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202010088308.1
• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111171116A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 劉勇;張松柏;張德詠;羅香文;彭靜;張宇;張卓
• 申請（專利權）人: 湖南省植物保護研究所
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C12N15/70;C07K16/10;G01N33/569
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 陳暉

1.一種辣椒斑駁病毒的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白為PepMoV CP蛋白，所述PepMoV CP蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種權利要求1所述的辣椒斑駁病毒的重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）以PepMoV CP基因為模板設計引物對，對感染PepMoV植物的cDNA進行PCR擴增得到擴增產物；

（2）酶切載體和所述擴增產物，用連接酶連接得到重組載體；

（3）將所述重組載體轉化至感受態細胞中得到轉化產物；

（4）從所述轉化產物分離出PepMoV CP重組蛋白。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中所述引物對包括上游引物和下游引物，所述上游引物為SEQ ID NO.2所示的DNA序列；所述下游引物為SEQ IDNO.3所示的DNA序列。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中所述載體為pET28α。

5.一種抗辣椒斑駁病毒多克隆抗體，其特征在于，所述多克隆抗體以權利要求1所述的PepMoV CP蛋白作為免疫原免疫大白兔得到。

6.一種權利要求5所述的抗辣椒斑駁病毒多克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述制備方法為：將權利要求1所述的PepMoV CP重組蛋白免疫大白兔獲得多克隆抗體。

7.一種用于檢測辣椒斑駁病毒的檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求5所述的抗辣椒斑駁病毒多克隆抗體。

8.根據權利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括PBST緩沖液、封閉液、辣根過氧化物酶標記羊抗兔二抗、顯色液和顯色終止液。

9.根據權利要求8所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述封閉液為含1% BSA的PBST緩沖液；所述顯色液為3 ,3 ',5 ,5 '-四甲基聯苯胺；所述顯色終止液為用無菌水配制的濃度為2 M的硫酸溶液。

10.一種權利要求7至9中任一項所述的檢測試劑盒在制備檢測辣椒斑駁病毒的檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述應用為ID-ELISA檢測，具體為：

S1-1、10×PBST緩沖液包被待測物，加入到酶標板中，用封閉液封閉；

S1-2、在酶標板中加入含有抗辣椒斑駁病毒多克隆抗體的一抗溶液，進行孵育；

S1-3、在酶標板中加入辣根過氧化物酶標記羊抗兔二抗的溶液，進行孵育；

S1-4、加入顯色液進行顯色，用酶標儀檢測OD450nm吸光值，OD 450nm吸光值≥2 .5倍為陽性，反應孔OD 450nm吸光值＜2 .5倍為陰性。