[發明專利]咪唑二肽的制備方法

在審

• 申請號: 202010087593.5
• 申請日: 2020-02-11
• 公開（公告）號: CN111560410A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 木野邦器
• 申請（專利權）人: 東海物產株式會社
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N9/00;C07K5/062
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

[課題]本發明的課題在于提供能夠高效率且低成本地生產選自肌肽及鵝肌肽及鯨肌肽的咪唑二肽的制備方法。[解決手段]本發明提供使用具有咪唑二肽合成活性的微生物制備咪唑二肽的方法，所述制備方法通過利用所述微生物具有的ATP供給系統，不包括添加ATP的工序，或包括添加以摩爾數換算計少于制備的咪唑二肽量的ATP量的工序。另外，提供由肌肽制備鵝肌肽的方法等。

技術領域

本發明涉及肌肽、鵝肌肽及鯨肌肽等咪唑二肽的制備方法。

背景技術

咪唑二肽為包含咪唑基的氨基酸殘基鍵合而成的肽的總稱，包括：肌肽(carnosine：β-丙氨酰-L-組氨酸)，鵝肌肽(anserine：β-丙氨酰-3-甲基-L-組氨酸)及鯨肌肽(balenine：Nα-β-丙氨酰-1-甲基-L-組氨酸)等包含β-丙氨酸與組氨酸殘基或其衍生物的二肽。這些二肽在長距離飛行的鳥類的胸肉，金槍魚、鰹魚、鯨等長距離回游的海洋生物的肌肉中含量較多，已知有抗疲勞效果、去除活性氧的能力、降血壓作用、抗炎作用及降低尿酸值作用等，已將從雞等家畜的肌肉提取的這些咪唑二肽用作營養補充劑食品(非專利文獻1～3)。但是，尚未建立針對肌肽、鵝肌肽及鯨肌肽的高效率且低成本的制備方法。

雖然也嘗試了制作L-氨基酸α-連接酶的突變體而在肌肽合成中的應用，但從效率且經濟的觀點出發仍不夠充分(專利文獻1)。

本發明人以建立咪唑二肽的簡便且低成本的制備方法為目標，制作了各種作為L-氨基酸α-連接酶的來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的YwfE的突變型(專利文獻2)。但是，L-氨基酸α-連接酶在β-丙氨酸與組氨酸或其衍生物進行縮合時，與ATP的水解反應共軛反應，因此，以往在咪唑二肽的制備反應時需要添加ATP。

另一方面，已知將肌肽轉換為鵝肌肽的酶(非專利文獻4)。但對于使用了大腸桿菌(E.coli)的由肌肽產生鵝肌肽的方法，尚屬未知。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2013-081405號公報

專利文獻2：日本特開2018-102287號公報

非專利文獻

非專利文獻1：Song B.等，Nutr.Res.Pract.2014，8：310

非專利文獻2：Bellia F.等，Molecules 2014，19：2299-2329

非專利文獻3：Boldyrev A.A.等，Physiol.Rev.2013，93：1803-45

非專利文獻4：Drozak J.等，J.Biol.Chem.2015，290：17190-17205

發明內容

發明所要解決的技術問題

本發明的課題在于提供能高效率且低成本地生產選自肌肽及鵝肌肽及鯨肌肽的咪唑二肽的制備方法。

解決問題的手段

作為咪唑二肽的酶合成法，本發明人著眼于通過與專利文獻2中記載的ATP的水解反應共軛，將無保護的氨基酸作為底物而形成肽鍵，由此合成咪唑二肽，發現通過將具有咪唑二肽合成活性的微生物與ATP供給系統組合，能高效率且低成本地制備咪唑二肽，從而完成了本發明。

另外，本發明人建立了由肌肽制備鵝肌肽的方法。

具體而言，本發明提供一種使用具有咪唑二肽合成活性的微生物制備咪唑二肽的方法，前述制備方法通過利用前述微生物具有的ATP供給系統，不包括添加ATP的工序，或包括添加以摩爾數換算計少于制備的咪唑二肽量的ATP量的工序。