[發明專利]油葵自交系離體培養的方法

在審

• 申請號: 202010087404.4
• 申請日: 2020-02-11
• 公開（公告）號: CN111109085A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 孫瑞芬;吳新榮;韓平安;聶利珍;郭樹春;牛素清;張立華;李素萍;于海峰;李曉東;聶惠;牟英男;常悅;唐寬剛;任芹勇
• 申請（專利權）人: 內蒙古自治區農牧業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H6/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了油葵自交系離體培養的方法，其包括如下步驟：(1)無菌苗獲得：取油葵自交系種子，用紗布包好后消毒，然后將消毒后的種子接種到固體培養基上培養獲得無菌苗；(2)不定芽誘導：剪取接種5d日齡的無菌苗子葉節，并垂直葉脈切1?2個小刀口，接種到不定芽誘導培養基上，誘導不定芽；(3)不定芽生根：當誘導出的不定芽長到1?2cm時，將芽從外植體上切下轉接于生根培養基上誘導生根；(4)當根生長到為3?5cm時進行煉苗及移栽步驟。本發明以油葵自交系為試材，優化了油葵離體培養獲得再生植株的技術方法，為實現油葵遺傳轉化奠定基礎。

技術領域：

本發明屬于農業生物技術領域，特別是涉及油葵自交系離體培養的方法。

背景技術：

向日葵(Helianthus annuus L.)是世界重要的油料作物，也是內蒙古地區主要的經濟作物。多年來，人們通過常規育種，對向日葵的產量、含油量、抗病蟲等特性進行了改良，育成了不少優良向日葵新品種，但常規育種程序繁瑣，需時長，且不易將優良性狀集中于后代。利用農桿菌介導的植物基因工程技術為向日葵品種改良開辟了新的途徑，但是任何目的基因能否轉移給受體并獲得轉基因植株，其中一個首要條件就是必須先建立起離體培養再生植株的方法。前人報道了向日葵根尖、莖尖、幼胚、花藥及子房、原生質體、子葉、下胚軸、真葉等外植體再生植株的研究，但向日葵屬于難再生的植物，且基因型不同，離體培養外植體選擇，及不定芽誘導培養基也會有顯著差異。而目前還沒有較為成熟的針對油葵自交系離體培養方法。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種油葵自交系離體培養的方法。

本發明的目的由如下技術方案實施：油葵自交系離體培養的方法，其包括如下步驟：

(1)無菌苗獲得：取油葵自交系種子，用紗布包好后消毒，然后將消毒后的種子接種到固體培養基上培養獲得無菌苗；

(2)不定芽誘導：剪取接種5d日齡的無菌苗子葉節，并垂直葉脈切1-2個小刀口，接種到不定芽誘導培養基上，誘導不定芽；

(3)不定芽生根：當誘導出的不定芽長到1-2cm時，將芽從外植體上切下轉接于生根培養基上誘導生根；

(4)當根生長到為3-5cm時進行煉苗及移栽步驟。

優選的，所述步驟(1)消毒方法為：自來水下沖洗0.5-1h，用75％酒精消毒1min，再用0.1％HgC1₂消毒8min，無菌水沖洗3-4次。

優選的，所述步驟(1)中，所述固體培養基為不加任何激素、pH為5.8-6.2的1/2MS固體培養基。

優選的，所述步驟(1)中，培養條件為24-26℃，光照16h/d，培養5天。

優選的，所述步驟(2)中，所述不定芽誘導培養基為MS+6-BA 1.0+IAA0.07+2,3,5-TIBA0.02+AgN0₃ 7.0+L-phe 5.0+KNO₃ 5000.0+CH 500.0+蔗糖30000.0+瓊脂7000.0，單位為mg/L，所述不定芽誘導培養基的pH為5.8-6.2。

優選的，所述步驟(3)中生根培養基為MS+IBA 0.5mg/L+瓊脂7000.0mg/L。

優選的，所述步驟(4)煉苗及移栽具體方法為：當根生長到3-5cm時，打開瓶蓋煉苗4-5d，期間在瓶內補充滅菌水，然后用鑷子將培養基輕輕攪破，小心取出小植株，移入事先滅菌的營養土中，澆透水并覆膜保濕于散射光下培養，待苗心開始生長時除去膜，待適應一段時間后，轉移到陽光下繼續培養。

本發明的優點：本發明選用5d日齡無菌苗的子葉節作為油葵自交系離體培養的外植體，同時配制適宜的不定芽誘導培養基和生根培養基，使得油葵自交系離體培養不定芽誘導率最高可達到77％，生根率為60％，移栽后成活率為33.3％。