[發明專利]一種基于微型分子標記的恰特草鑒定方法及應用

有效

• 申請號: 202010085501.X
• 申請日: 2020-02-08
• 公開（公告）號: CN111139312B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 陳云霞;南程慧;薛曉明;謝春平;吳顯坤;黃婭琳;郭海濤;蔣敬;吉小林
• 申請（專利權）人: 南京森林警察學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

本發明公開了一種基于微型分子標記的恰特草鑒定方法及應用，具體涉及一組恰特草分子鑒定DNA條形碼標記引物的開發及應用。本發明基于恰特草的葉綠體基因組開發得到用于毒品原植物恰特草種屬鑒定的微型分子標記，使用設計開發的11對微型分子標記引物可對DNA嚴重降解的恰特草干燥葉片進行鑒定，特異性好、靈敏度高、可靠性強，可應用于毒品原植物恰特草非法買賣、走私等案件的物證鑒定，有利于加強毒品原植物犯罪活動的打擊。

技術領域

本發明屬于物種鑒定技術領域，具體涉及恰特草分子鑒定微型分子標記引物的開發及應用。

背景技術

恰特草(Catha edulis)，又名巧茶、也門茶、阿拉伯茶、埃塞俄比亞茶等，原產于東非和阿拉伯半島地區，現廣泛分布于阿拉伯半島和埃塞俄比亞等非洲國家。恰特草含興奮化學物質卡西酮，對人體中樞神經具有刺激作用，長期嚼食會染癖成癮，又被稱為“東非罌粟”，具有嚴重的社會危害性。

近年來，毒品原植物恰特草的非法走私頻有發生，其外觀酷似茶葉，偽裝性極強，主要通過旅客行李箱夾藏、郵包郵寄等方式非法攜帶入境。對于非法走私的是否為毒品原植物恰特草，除了化學成分分析確認其含有卡西酮外，其種屬認定也是案件定性所必須的。通常非法走私入境的都是恰特草的干燥葉片(如圖1所示)，此類葉片均經過特殊烘制及干燥，如果形態完整可以通過傳統的形態識別進行種屬鑒定，但往往犯罪嫌疑人為了增加辨認難度，通常會將葉片粉碎(如圖3所示)，形態完全無法進行識別，所以DNA分子鑒定是其種屬識別的最佳方法。但是目前植物分子鑒定并沒有像動物一樣通用的DNA條形碼，各植物類群有自己的特殊性，即使是相對而言比較通用的mat K、rbc L等分子標記，因其片段長度都大于700bp，對于這種經過烘制的枝葉碎片，其DNA發生大量降解的樣本并不適用，往往無法成功擴增出目的片段。這也嚴重阻礙了其種屬的準確鑒別，為毒品原植物走私犯罪的打擊帶來困擾。

發明內容

本發明立足DNA條形碼分子標記技術在特殊用途植物類群中的研究空白，以恰特草葉綠體基因組為參照開發毒品原植物恰特草種屬鑒定的微型分子標記并在案件物證鑒定中應用，旨在為毒品原植物的犯罪打擊提供技術支持。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一組恰特草分子鑒定DNA條形碼，包括mat K、rbc L和trn H-psb A。

上述恰特草分子鑒定DNA條形碼在恰特草樣品種屬鑒定中的應用。

進一步地，所述恰特草樣品的DNA發生降解。

一組用于鑒定上述DNA條形碼的引物，所述引物序列如下：

CeK1-F 5'CCGCAAAGTAGAAGAAGC 3'(SEQ ID NO.1)

CeK 1-R 5'ACGGAGTCAAATGGTGGA 3'(SEQ ID NO.2)

CeK 2-F 5'TGCCAATAATCCAATCAAAG 3'(SEQ ID NO.3)

CeK 2-R 5'TGCCAATAATCCAATCAAAG 3'(SEQ ID NO.4)

CeK 3-F 5'GATTCGCTCAAGAAGGAC 3'(SEQ ID NO.5)

CeK 3-R 5'GATGCTGGGTGAAAGATG 3'(SEQ ID NO.6)

CeK 4-F 5'TTCCAAGTCCAATACTCA 3'(SEQ ID NO.7)

CeK 4-R 5'TACTCGAATGGATCAACA 3'(SEQ ID NO.8)

CeK 5-F 5'AATGACTGAGAAACCCTC 3'(SEQ ID NO.9)