[發(fā)明專利]一種用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010083726.1
• 申請(qǐng)日: 2020-02-10
• 公開（公告）號(hào): CN111235103A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊朝勇;吳玲玲;宋彥齡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078;C12N5/09;B01J13/04;C12M1/00;B01L3/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 徐俊

1.一種用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡，其特征在于，包括由天然細(xì)胞膜或仿生膜包繞形成的球體結(jié)構(gòu)，所述膜的膜界面上修飾有特異性識(shí)別分子。

2.如權(quán)利要求1所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡，其特征在于，所述天然細(xì)胞膜包括白細(xì)胞膜、紅細(xì)胞膜、血小板膜或腫瘤細(xì)胞膜中的一種；所述仿生膜包括各種組分的脂質(zhì)體。

3.如權(quán)利要求1所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡，其特征在于，所述特異性識(shí)別分子選自抗體、核酸適體、多肽及配體中的一種或多種。

4.如權(quán)利要求1所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡，其特征在于，所述特異性識(shí)別分子通過疏水相互作用、生物親和作用或化學(xué)共價(jià)作用中的至少一種修飾于所述膜界面。

5.如權(quán)利要求1所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡，其特征在于，所述仿生納米囊泡修飾有2-2000個(gè)特異性識(shí)別分子。

6.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

①天然細(xì)胞膜來源納米囊泡制備：采用機(jī)械破碎法將細(xì)胞懸液破碎為勻漿；采用蔗糖密度梯度離心進(jìn)行細(xì)胞膜碎片的分離和純化；采用納米擠出器將細(xì)胞膜碎片擠出為粒徑為50～400nm的納米囊泡；

②人工仿生膜的納米囊泡制備：將氯仿溶解的二油酰磷脂酰膽堿溶液旋蒸以除去氯仿，在燒瓶底部形成磷脂薄膜，并置于真空冷凍干燥機(jī)中干燥過夜；采用磷酸鹽緩沖重懸磷脂薄膜，并將重懸液置于45℃和液氮中反復(fù)凍融10次，形成脂質(zhì)體；利用納米擠出器擠壓粒徑為50～400nm的脂質(zhì)體納米囊泡。

7.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡在捕獲分離腫瘤細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于，使權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡與含有腫瘤細(xì)胞的液體接觸進(jìn)行孵育和捕獲。

8.一種仿生膜納米界面微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括基板和設(shè)置于所述基板上的微陣列，所述基板兩側(cè)分別設(shè)有三個(gè)進(jìn)樣口和至少一個(gè)出樣口；其中所述微陣列位于所述進(jìn)樣口與出樣口之間，由多個(gè)成行排列的微柱組成；所述微陣列中各微柱表面修飾有權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的用于細(xì)胞捕獲的流動(dòng)識(shí)別納米囊泡。

9.如權(quán)利要求8所述的仿生膜納米界面微流控芯片，其特征在于，所述微陣列由多個(gè)依據(jù)確定性側(cè)向位移原理成行排列的三角形微柱組成；所述微陣列的整體臨界直徑為Dc，Dc＝1.4×G×(Δλ/λ)0.48，其中，G為所述微柱與同列下一行微柱間的垂直間距；λ為同一列微柱中，各微柱垂心間距離；Δλ為同一行微柱中，后一微柱垂心相較前一微柱垂心的垂直于流體方向的偏移距離；所述Dc小于所述細(xì)胞直徑。

10.如權(quán)利要求9所述的仿生膜納米界面微流控芯片，其特征在于，所述Dc為0～32.3μm；G為0～50μm；λ為100～150μm；Δλ為0～20μm；所述三角形微柱的邊長為10～200μm。

11.如權(quán)利要求8所述的仿生膜納米界面微流控芯片，其特征在于，所述基板和或微陣列的材料為聚二甲基硅氧烷。

12.如權(quán)利要求8所述的仿生膜納米界面微流控芯片，其特征在于，所述仿生納米囊泡經(jīng)物理吸附或共價(jià)鍵固定于所述微柱表面。

13.如權(quán)利要求8所述的仿生膜納米界面微流控芯片，其特征在于，所述仿生納米囊泡經(jīng)生物素化，與微柱表面修飾的鏈霉親和素發(fā)生共價(jià)相互作用，固定于所述微柱表面。

14.一種捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于，包括使含有腫瘤細(xì)胞的液體通過權(quán)利要求8～13中任一項(xiàng)所述的仿生膜納米界面微流控芯片。