[發明專利]高產紅曲色素的紅曲霉菌株及利用其生產胞外色素的方法

有效

• 申請號: 202010083561.8
• 申請日: 2020-02-08
• 公開（公告）號: CN111172044B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 劉俊;吳井艷;林親錄;羅運川;白婕;郭亭
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N13/00;C12N11/10;C12P1/02;C09B61/00;C09B67/54;C12R1/645
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 吳越

1.高產紅曲色素的紅曲霉菌株，其特征在于：其分類命名為紫色紅曲霉菌(Monascuspurpureus)，菌株號為CSU-M630，保藏編號為CCTCC?NO：M?2019596，保藏日期為2019年8月1日，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心。

2.如權利要求1所述的高產紅曲色素的紅曲霉菌株，其特征在于所述菌株采用如下方法獲得：

將親本菌株LQ-6CCTCC?NO：M?2018600利用常壓室溫等離子體誘變系統進行誘變，誘變條件為：產生等離子體的載氣為99.999％的高純氦氣，氣量為10.00SLM，入射功率120W，工作距離2mm，處理時間為150s，得誘變后的菌液；之后從誘變后的菌液中篩選出紅曲色素產量最大的誘變菌株，即得如權利要求1所述的高產紅曲色素的紅曲霉菌株。

3.如權利要求2所述的高產紅曲色素的紅曲霉菌株，其特征在于，所述誘變菌株的篩選方法如下：

1)將誘變后的菌液均勻涂布于PDA平板中，于30℃中避光倒置培養7d，淘汰菌落明顯偏小、生長速度慢、菌絲稀薄的菌落，篩選出菌落形態與原菌株有明顯差異、生長較快或特別紅的單菌落；

2)將步驟1)篩選出的單菌落接種至PDA平板培養基中，并對應編號，于30℃避光倒置培養7d，得到培養好的突變株；

3)將步驟2)獲得的突變株接種至PDB培養基中，于30℃、150r/min黑暗振蕩培養7d，得突變株孢子懸液；將突變株孢子懸液接入發酵液中，于30℃、150r/min黑暗振蕩培養7d后測定紅曲胞外色素，篩選出產量最大的菌株。

4.一種生產紅曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于包括如下步驟：

1)制備紅曲霉菌孢子懸浮液：將權利要求1所述的胞外色素紅高產曲霉菌株制成濃度為1.0×10⁶孢子/mL的紅曲霉菌孢子懸浮液；

2)包埋固定化：將紅曲霉菌孢子懸浮液與已滅菌的質量濃度為3％的海藻酸鈉溶液以質量比1:7～10g/g的比例混合均勻制成海藻酸鈉-孢子懸浮液，待氣泡消失后逐滴滴入至已滅菌的質量濃度為8％的氯化鈣溶液中，制成直徑為2～3mm的固定化顆粒，之后繼續讓固定化顆粒在氯化鈣溶液中于2～8℃條件下浸泡2～6h，然后濾出固定化顆粒，用生理鹽水洗三次，之后將固定化顆粒浸泡在生理鹽水中于2～8℃保存備用；

3)多批次連續發酵：將包埋固定化后的紅曲霉菌孢子懸浮液進行發酵罐分批發酵；

4)分離純化：將發酵后的發酵液經過大孔吸附樹脂將紅曲色素分離純化。

5.如權利要求4所述的一種生產紅曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于，所述步驟(1)制備紅曲霉菌孢子懸浮液具體為，將權利要求1所述的胞外色素紅高產曲霉菌株用馬鈴薯葡萄糖培養基在30℃條件下培養7d，之后用4層無菌醫用紗布過濾發酵液，0.85％生理鹽水等體積洗滌兩次，0.85％生理鹽水調整至孢子數1.0×10⁶個/mL。

6.如權利要求4所述的一種生產紅曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于，所述步驟(2)包埋固定化具體為，將紅曲霉菌孢子懸浮液與已滅菌的質量濃度為3％的海藻酸鈉溶液以質量比1:9g/g的比例混合均勻制成海藻酸鈉-孢子懸浮液，待氣泡消失后逐滴滴入至已滅菌的質量濃度為8％的氯化鈣溶液中，制成直徑為2～3mm的固定化顆粒，之后繼續讓固定化顆粒在氯化鈣溶液中于4℃條件下浸泡4h，然后濾出固定化顆粒，用生理鹽水洗三次，之后將固定化顆粒浸泡在生理鹽水中于4℃保存備用。

7.如權利要求4所述的一種生產紅曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于，所述步驟(3)多批次連續發酵中，按照接種量為8％～12％的孢子懸浮液制備成固定化顆粒接種。