[發明專利]一種模擬蚊蟲叮咬癥狀的動物模型的構建方法

有效

• 申請號: 202010082556.5
• 申請日: 2020-02-07
• 公開（公告）號: CN111436397B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 吳葩;李文倩;鄧芳清
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛

本發明涉及動物模型技術領域，公開了一種模擬蚊蟲叮咬癥狀的動物模型的構建方法。本發明中直接使用雌性成蚊對豚鼠進行叮咬或免疫唾液蛋白混合物導致豚鼠產生癢覺，并且該模型可以通過抓撓次數量化評估癢覺程度，相對于其他癢覺模型更加直接有效。同時，本發明中聯合使用免疫唾液蛋白混合物和雌性成蚊叮咬導致豚鼠的癢覺效應，表現為更顯著的皮膚紅腫和皮疹癥狀；本發明動物實驗模型有助于高效地篩選和研發防蚊止癢藥物。

技術領域

本發明涉及動物模型技術領域，具體涉及一種模擬蚊蟲叮咬癥狀的動物模型的構建方法。

背景技術

蚊蟲在全世界各地廣泛分布，隨著全球一體化發展和氣候變暖，蚊蟲分布和危害范圍不斷擴大。白紋伊蚊又稱亞洲虎蚊，其身體呈黑色帶銀白色斑紋，行動敏捷，擅長飛翔，對環境的適應力強，叮咬人后產生的皮膚反應較為嚴重。白紋伊蚊原本活躍于我國中部及東南沿海一帶，主要在溫度高、雨量大的地區孳生。近二十年白紋伊蚊開始在全球范圍內迅速擴散，成為危害較大的侵入物種。

蚊蟲叮咬導致包括瘙癢、紅疹風團、紅腫和灼熱等局部皮膚癥狀。嚴重時患者在蚊蟲叮咬后2-6小時內叮咬處局部皮膚產生水腫、出血性壞死等劇烈炎癥反應或阿瑟氏反應。蚊蟲叮咬導致的紅斑丘疹伴瘙癢癥狀嚴重影響人們的生活質量，干擾人類的正常工作和休息。因此，建立合理的動物實驗模型對于研發專門針對蚊蟲叮咬導致的紅斑丘疹伴瘙癢癥具有重要意義。

目前用于蚊蟲叮咬止癢消腫藥物研發的動物模型包括：1.二甲苯誘導小鼠耳腫脹的動物模型。二甲苯是一種具有致癌作用的化學物質，接觸可以導致皮膚干燥、皸裂和皮炎，應用于小鼠耳腫脹模型的誘導劑。二甲苯引發的皮炎的機理是介導炎癥介質釋放，引起局部血管擴張，毛細血管通透性增加，炎癥細胞浸潤，從而產生皮膚滲出性炎癥水腫。而蚊蟲叮咬導致的紅斑丘疹伴瘙癢癥狀是一種IgE-、IgG-和T淋巴細胞參與的超敏反應，因此二甲苯不適合用于評估蚊蟲止癢藥物的有效性；2.外源性組胺誘導的皮膚致癢模型。即在健康小鼠皮膚注射組胺誘導其產生癢覺(出自專利：雌激素易化組胺誘發小鼠瘙癢的外周受體機制研究)。雖然蚊蟲叮咬可以誘導人體產生組胺并由此產生癢覺反應，但是組胺受體的拮抗劑不能有效抑制蚊蟲叮咬導致的癢覺，說明叮咬引發的癢覺是由組胺在內的多種成分協同誘導的復合應答。因此，組胺可誘導最接近蚊蟲叮咬的表型，但并不是最理想的蚊蟲止癢藥物研發評估模型；3.中藥組合花露水直接應用于人體受試者(出自專利：一種用于蚊蟲叮咬后止癢消腫的中藥組合物及其制備方法)。直接招募人體受試者可以最為直接和真實的評估藥物的效果，然而目前人體實驗的倫理審查管理日趨嚴格。這種藥物研發方式常用于祖方中草藥物配方的改良，并不適用于大規模篩選有效的單一蚊蟲止癢消腫新藥；4.低濃度甲酸誘導小鼠疼痛伴丘疹模型(出自專利：一種用于蚊蟲叮咬的消皰止癢液)。將小白鼠背部去毛，用注射器將小量低濃度甲酸注于表皮，觀察小白鼠去毛背部狀況及其活動情況。甲酸是蟻科昆蟲毒液的主要有效成分，主要使脊椎動物產生痛覺從而達到防御的效果。低濃度甲酸導致的疼痛與蚊蟲叮咬導致的癢覺具有完全不同的信號傳導通路與分子機制，因此低濃度甲酸誘導的小鼠痛覺模型并非合適的蚊蟲止癢藥物研發模型。

綜上所述，為了緩解夏季蚊蟲叮咬導致的紅斑丘疹伴瘙癢癥，亟需建立有效的動物實驗模型，以便高效地篩選和研發防蚊止癢藥物。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種模擬蚊蟲叮咬癥狀的動物模型的構建方法，使得所述構建方法能夠構建出蚊蟲叮咬人類皮膚引發紅疹風團伴瘙癢癥狀高度相似的動物模型，并通過動物抓撓次數和回數進行客觀量化，有助于高效地篩選和研發防蚊止癢藥物。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種模擬蚊蟲叮咬癥狀的動物模型的構建方法，包括：

將豚鼠麻醉后每兩天用雌性成蚊叮咬，叮咬次數在3-6次，獲得所述動物模型；

或從雌性成蚊頭、胸部提取唾液蛋白混合物首免豚鼠，然后每一周加強免疫一次，共兩次，獲得所述動物模型；