[發明專利]一種利用組培技術制備腸道無菌昆蟲幼蟲模型的方法

有效

• 申請號: 202010081744.6
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN111248154B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 龍雁華;徐世靜;蘇青青;吳珍珍;周曉敏;趙天宇;張勇;趙玉;崔雨晨;王春玲;王一君;徐樂天;楊云秋
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學;徐樂天;徐世靜
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;A23K50/90;A23K10/30;A61L2/18;A61L101/34;A61L101/06
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

本發明公開了一種利用組培技術制備腸道無菌昆蟲幼蟲模型的方法，屬于生物技術領域。所述方法是利用組織培養技術得到的無菌植株飼喂昆蟲幼蟲，進而獲得相應的腸道內完全無菌的昆蟲幼蟲；所述昆蟲幼蟲是由經消毒處理后的受精卵孵化而成。本發明以無菌的組培苗喂食孵化出的幼蟲，可避免外源微生物進入昆蟲腸道，與抗生素相比，能夠完全地去除茶尺蠖腸道內細菌，從而獲得腸道無菌的昆蟲動物模型；實驗中所用的無菌組培苗培養溫度在25±2℃下，可適當延長光照周期，從而達到快速繁殖的目的，以供昆蟲幼蟲取食所需。因此，本腸道無菌的昆蟲動物模型的建立將極大地促進昆蟲與其腸道菌群協同互作的相關機制研究。

技術領域

本發明涉及一種利用組培技術制備腸道無菌昆蟲幼蟲模型的方法，屬于生物技術領域。

背景技術

昆蟲的種類豐富多樣，其體內棲息著大量的微生物。這些微生物與宿主昆蟲在長期協同進化過程中形成了相互依存的共生關系。共生菌在昆蟲的營養、代謝、免疫和生殖等諸多生理功能上發揮著重要作用。

為研究探索昆蟲與其腸道菌群協同互作的分子生理學機制，建立一種腸道內無菌的昆蟲幼蟲動物模型有助于研究腸道菌群在昆蟲發育、代謝、免疫等諸多生理功能的作用，以及腸道微生物-昆蟲-植物三者之間的協同進化關系。

目前獲得腸道內無菌的昆蟲幼蟲的方法包括：抗生素處理、無菌人工飼料等。然而通過飼喂抗生素清除昆蟲腸道菌群，由于受抗生素自身的作用功效局限和昆蟲腸道環境因子的影響，抗生素飼喂的方法并不能完全清除昆蟲腸道菌群；而利用無菌人工飼料飼養昆蟲，由于改變了昆蟲自然食物及寄主植物提供給昆蟲的生活棲境，從而會影響無菌昆蟲模型的建立，而且一種人工飼料并不適合所有昆蟲，人工飼料的研制費時費力。上述因素制約了無菌昆蟲幼蟲的模型建立，也限制了昆蟲腸道微生物的研究。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種腸道無菌的昆蟲幼蟲動物模型的創建方法，利用組織培養技術得到的無菌植株飼喂植食性昆蟲幼蟲，進而獲得相應的腸道內完全無菌的昆蟲幼蟲。組織培養技術得到的無菌植株優勢在于可以人工獲得大量的無菌寄主植物，昆蟲取食原寄主植物不存在改變食物而引起不適應的癥狀；保證了無菌昆蟲的正常發育。而且腸道內的微生物也能通過該方法完全清除。

本發明的第一個目的是提供一種腸道無菌昆蟲幼蟲的制備方法，所述方法是利用組織培養技術得到的無菌植株飼喂昆蟲幼蟲，進而獲得相應的腸道內完全無菌的昆蟲幼蟲；所述昆蟲幼蟲是由經消毒處理后的受精卵孵化而成。

在本發明的一種實施方式中，所述昆蟲為植食性昆蟲，包括茶尺蠖、柳藍葉甲。

在本發明的一種實施方式中，所述消毒處理是將受精卵粒浸泡在消毒液中。

在本發明的一種實施方式中，所述消毒液為次氯酸鈉或乙醇。

在本發明的一種實施方式中，所述次氯酸鈉濃度為1-5％(v/v)，浸泡時間為0.5-5min。

在本發明的一種實施方式中，所述乙醇濃度為50-90％(v/v)，浸泡時間為1-10min。

在本發明的一種實施方式中，優選地，乙醇濃度為浸泡在濃度為75％乙醇溶液中5min。

在本發明的一種實施方式中，無菌植株為無菌組培苗。

在本發明的一種實施方式中，所述孵化條件為：溫度為22-26℃；濕度為60-85％；光照時間/黑暗時間＝(14-18)h/(6-10)h。

在本發明的一種實施方式中，所述方法具體包括以下步驟：

(1)收集昆蟲的受精卵，選取生長狀況良好的雌雄成蟲配對，交配產卵后收集受精卵粒；

(2)將收集的卵粒浸泡在消毒液中進行殺菌消毒，以充分清除卵粒表面的微生物；