[發明專利]一種鑒定楓香屬植物的分子標記引物、其應用及鑒定方法

有效

• 申請號: 202010081093.0
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN111334598B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 張金鳳;陳思源;董明亮;趙健;范英明;孔立生
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 喻蓉

本發明公開了一種鑒定楓香屬植物的分子標記引物、其應用及鑒定方法。本發明通過高通量測序所得的轉錄組序列為基礎進行了楓香EST?SSR標記的開發，從NCBI數據庫下載轉錄組序列讀段，拼接組裝Unigenes。用MISA軟件尋找SSR位點，用Primer3來設計引物。篩選多態性SSR引物，得到多態性引物信息。最終得到多態性SSR引物32對。本發明提供的引物可以輔助鑒定楓香屬品種的鑒定并作為種質資源評價，遺傳圖譜構建，分子輔助選擇育種，遺傳多樣性分析等方面有力的研究工具，為進一步的楓香屬植物遺傳育種研究奠定基礎。

技術領域

本發明涉及一種鑒定植物的分子標記引物、其應用以及植物鑒定方法，特別涉及一種鑒定楓香植物的EST-SSR分子標記引物、其應用以及植物鑒定方法，本發明屬于植物品種的分子生物學鑒定方法技術領域。

背景技術

楓香屬(Liquidambar spp.)樹種生長速度快、材性好并且適于上山造林，特別是北美楓香(L.styraciflua)和楓香(L.formosana)。另外，隨著我國的國民經濟水平日益提高，對具有較高觀賞價值的樹種需求也與日俱增。楓香和北美楓香是著名觀賞樹種，具有較高的開發價值。楓香屬樹種是虎耳草亞目金縷梅科的落葉喬木，共有5個種及1個變種，我國有楓香樹(中國楓香樹)，缺萼楓香樹以及山楓香樹，主要分布于我國東部黃河以南地區及臺灣省，生長速度快，在天然野生狀態下也表現出很強的適應性。其材質優良，用途廣泛，而且對二氧化硫，氯化物有較強的抗性，楓香樹屬共有5個種及1個變種，我國有楓香樹(中國楓香樹)，缺萼楓香樹以及山楓香樹，近年來，北美楓香樹及蘇合楓香樹在我國也得到了培養及種植。楓香樹屬植物均為落葉喬木，葉互生，掌狀分裂且具掌狀脈，葉緣呈鋸齒狀；雌雄同株的單性花，花瓣無，子房兩室，半下位；蒴果木質。楓香樹生長于平原，丘陵及山地常綠闊葉林中，其高度可達30米，胸徑最大可達1米。光照充足，濕潤溫暖的氣候及肥沃而深厚的紅黃壤土適宜其生長。其主根粗長，有較強的抗風性，移植及修剪不利于其生長。種子有隔年發芽的習性，對鹽堿及干旱的抗性較差，不耐寒，黃河以北地區不能露地越冬，故多生長于南方地區。我國秦嶺及淮河以南各省均，北起河南、山東，東至臺灣，西至四川、云南及西藏，南至廣東都有分布，世界范圍內亦見于朝鮮南部，越南及老撾地區。我國秦嶺及淮河以南各省均，北起河南、山東，東至臺灣，西至四川、云南及西藏，南至廣東都有分布，世界范圍內亦見于朝鮮南部，越南及老撾地區。楓香幼年生長速度較慢，但壯年后生長速度很快且樹木材質良好，適應性強，是公認的植樹造林中的“先鋒樹種”。楓香木制細密柔軟，方便加工處理，在干燥環境下十分耐用，有“擱起萬年楓”的說法，其根，葉，皮，花序樹脂均能入藥，樹脂藥用有解毒止痛、止血生肌之效，又可作香料之定香劑；根、葉及果實有祛風除濕，通絡活血功效，葉為止血良藥。對腸胃疾病，痢疾等癥有治療效果。在園林用途方面，楓香樹干粗壯筆直，氣勢雄偉，其冠部寬闊，樹葉深秋時顏色鮮紅，十分美麗壯觀，在園林中可栽做庭蔭樹，與常綠樹種混植，秋季紅綠相映，如陸游道“數樹丹楓映蒼檜”，構成一幅宜人美景。又因其對有毒氣體抗性較強，尤其對SO2以及氯化物的抗性極強，常用于廠礦區綠化。楓香樹葉中的化學成分以酚類，揮發油，和黃酮類為主。由于其含有較多黃酮類衍生物。

SSR序列是一種串聯重復序列片段，以最少一個核苷酸為基本單位(simplesequence repeats)，稱SSR，又稱微衛星DNA(microsatellite DNA)，以1-4個堿基為重復單位的序列最常見，例如(TG)n、(GA)n、(GTA)n等，長度不大于200bp，在真核生物的基因組中廣泛存在，包括非編碼區、編碼區及染色體上的某一區。SSR分子標記技術具有共顯性、涵蓋度廣、檢測簡易、操作方便、用時短、揭示多態性高等優點，加之近幾十年的不斷發展，更加得到了廣泛的應用。是基因定位、構建遺傳連鎖圖譜、研究群體遺傳學、構建指紋數據庫、分子標記輔助育種及品種鑒定等的理想工具。SSR在植物種間、種內群體間、乃至群體個體間均存在高度多態性，不同物種的SSR序列在組成、長度、重復次數、突變率及在染色體上的分布情況表現出高度的多態性，反映出高度的等位基因多樣性。