[發明專利]一種小鼠白內障動物模型及其應用

在審

• 申請號: 202010080386.7
• 申請日: 2020-02-05
• 公開（公告）號: CN111269944A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 陳鵬;狄國虎;陳豪
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;A01K67/027
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

本發明提供一種白內障動物模型的構建方法，是通過敲除動物中AQP5基因來構建白內障動物模型；并培養不少于6個月來構建的。所述的敲除AQP5基因，是通過敲除小鼠第15條染色體上的99589876?99594444區域，長度為4569bp的基因片段。本發明還提供一種白內障小鼠模型，是通過上述的方法敲除AQP5基因來構建的。本發明所提供的白內障小鼠模型應用于研究白內障的發病機制或評價白內障治療藥物的效果。本發明的AQP5?KO模型小鼠，可重復性高，模型穩定，有利于白內障病理機制的研究和藥物干預，可避免其他影響因素對實驗結果產生影響。而且本發明的AQP5?KO小鼠模型，在出生后6個月即出現進行性的晶狀體混濁癥狀，并且無性別差異。

技術領域

本發明屬于醫用動物模型技術領域，具體涉及一種白內障動物模型的建立方法。

背景技術

白內障是指各種原因如老化，遺傳、局部營養障礙、免疫與代謝異常，外傷、中毒、輻射等，引起晶狀體代謝紊亂，導致晶狀體蛋白質變性而發生混濁。目前，在世界范圍內白內障排在致病性眼病的首位，白內障預防和治療是眼科科研重點。

由于患者晶狀體的透明性受到多種高因素的影響，并且白內障表現出的高度異質性，目前關于白內障的發病機制、診斷和治療的一系列基礎以及臨床問題尚有待進一步深入研究。建立白內障動物模型，是研究其發病機制和探索治療方法的有效且實用的手段。其中先天性白內障可能是由染色體異?；蚧蛲蛔兊纫蛩匾?，目前主要由三種途徑制作模型，第一種是利用基因手段建立的轉基因小鼠或基因突變的小鼠品系；第二種是利用物理或者化學方法誘導基因突變；第三種是通過對不同基因組位點定向打靶或者敲除。白內障具有高度的遺傳異質性，任何與晶狀體發育和分化有關的基因突變都可能形成遺傳性白內障，所以白內障的致病基因也很多，其中許多基因目前還沒有對其致病機制作具體分析，同時還存在很多的未知基因。為此，需要制作更多的白內障動物模型，為白內障的發病原因、病程進展、藥物研發及藥效評價等基礎和臨床研究提供重要載體。

發明內容

本發明的目的在于克服現有模型種類的不足，提供一種穩定的白內障動物模型，從而彌補現有技術的不足。

申請人采用CRISPR/Cas9技術，設計sgRNA，應用高通量電轉受精卵方式，獲得AQP5基因敲除小鼠(AQP5-KO)。并且首次證明AQP5-KO小鼠，出生后6個月即表現為白內障，模型的表型穩定，從而促成了本發明。

本發明首先提供一種白內障動物模型的構建方法，是通過敲除動物中AQP5基因來構建白內障動物模型；

所述的敲除AQP5基因，是通過敲除小鼠第15條染色體上的99589876-99594444區域，長度為4569bp的基因片段；

所述的構建方法，是敲除小鼠的AQP5基因，出生培養不少于6個月來構建的；

所述的敲除動物中AQP5基因，是通過CRISPR/Cas9系統來完成的；

本發明還提供一種白內障小鼠模型，是通過上述的方法敲除AQP5基因來構建的

所述的敲除AQP5基因，是通過敲除小鼠第15條染色體上的99589876-99594444區域，長度為4569bp的基因片段；

本發明還提供一種用于檢測AQP5-KO小鼠的制品，所述的制品中包含有用于檢測上述缺失片段的引物對；

其中用于檢測上述缺失片段的引物對，其一種序列信息如下：

AQP5-F1:CAAAGTGCTCAAACACTAACCGTAC(SEQ ID NO:1)

AQP5-R1:GATTGGTGGTTTATTGGGAAACG(SEQ ID NO:2)。

AQP5-R3:TGCAGGTCTTTGTTTCTGCCG(SEQ ID NO:3)。