[發(fā)明專利]Ndufs2基因條件性點突變小鼠模型及其構建方法和應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010080031.8 | 申請日： | 2020-02-04 |
| 公開（公告）號： | CN111304258B | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發(fā)明（設計）人： | 邊希云 | 申請（專利權）人： | 天津市第五中心醫(yī)院（北京大學濱海醫(yī)院） |
| 主分類號： | C12N15/90 | 分類號： | C12N15/90;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226 | 代理人： | 王雨杰 |
| 地址： | 300000 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | ndufs2 基因 條件 突變 小鼠 模型 及其 構建 方法 應用 | ||
1.Ndufs2基因條件性點突變小鼠模型的構建方法，其特征在于：所述小鼠模型Ndufs2基因的第425位的賴氨酸突變?yōu)榫彼幔ㄈ缦虏襟E：
S1：體外轉錄sgRNA；
S2：構建Cas9打靶載體和donor載體；
S3：將Cas9打靶載體、sgRNA及donor載體顯微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵進行同源重組，獲得F0代小鼠；
S4：經PCR和測序驗證陽性的F0代小鼠與C57BL/6J小鼠交配獲得可穩(wěn)定遺傳的F1代小鼠模型。
2.根據(jù)權利要求1所述的Ndufs2基因條件性點突變小鼠模型的構建方法，其特征在于：所述步驟S1包括如下步驟：確定小鼠待敲除基因的靶位點，設計針對Ndufs2-T1、Ndufs2-T2的sgRNA，所述Ndufs2-T1的sgRNA序列如SEQ?ID?NO.1所示；所述Ndufs2-T2的sgRNA序列如SEQ?ID?NO.2所示。
3.根據(jù)權利要求2所述的Ndufs2基因條件性點突變小鼠模型的構建方法，其特征在于：所述步驟S2包括如下步驟：
a、人工合成5′端帶有不同酶切位點識別序列的靶序列寡核苷酸引物，通過PCR對兩對引物直接退火，合成出攜帶不同的黏性末端的靶序列DNA短片段，將其插入到CRISPR/Cas9表達載體pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9?U6啟動子下游，構建小鼠Ndufs2兩個靶點的CRISPR/Cas9打靶載體pX330-U6-Ndufs2T1-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9和pX330-U6-Ndufs2T2-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9；
b、構建Donor載體，所述Donor載體的序列如SEQ?ID?NO.3所示。
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