[發明專利]A型塞內卡病毒的微滴數字PCR檢測引物、探針及其應用

有效

• 申請號: 202010078855.1
• 申請日: 2020-02-03
• 公開（公告）號: CN111139314B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 閆若潛;班付國;謝彩華;王東方;劉梅芬;劉影;程果;趙雪麗;王華俊;馬震原;楊海波;王翠;錢勇;王淑娟;郭育培;劉敏;宋丹;劉先敏;田中
• 申請（專利權）人: 河南省動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種A型塞內卡病毒的微滴數字PCR檢測引物探針組合物，其特征在于，引物的核苷酸序列為：

上游引物F：5’-TGCACCCCTTCGCTGACTACGGT-3’；

下游引物R：5’-GAGTTCTCCCAGAATCGCCG-3’；

探針的核苷酸序列為：

探針P：5’-GCCTTGTTCGACTGACCTGG-3’。

2.權利要求1所述的引物探針組合物在制備A型塞內卡病毒檢測試劑或試劑盒中的應用。

3.含有權利要求1所述的引物探針組合物的試劑或試劑盒。

4.根據權利要求3所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：微滴發生油、質控液、陽性對照、陰性對照、RNA陽性模板、緩沖液中的一種或多種。

5.一種非疾病診斷目的的檢測A型塞內卡病毒的方法，其特征在于，包括：

(1)提取待測樣品的RNA，獲得微滴數字PCR反應模板；

(2)利用權利要求1所述的引物探針組合物進行微滴數字PCR擴增。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述微滴數字PCR擴增的反應體系為：One-step?ddPCR?supermix?5.0μl，Reverse?transcriptase?2.0μl，300mM?DTT1.0μl，10μM上游引物1.8μl，10μM下游引物1.8μl，10μM探針0.5μl，水5.9μl，RNA模板2.0μl。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述微滴數字PCR擴增的反應程序為：50℃20min；95℃，10min；94℃30秒，退火溫度55℃45秒，40個循環；98℃10min；12℃60min；升降溫速率2.5℃/s。