[發明專利]一種小鼠腦片神經元復蘇液、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202010075958.2
• 申請日: 2020-01-23
• 公開（公告）號: CN111269886A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 莊乾興
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及離體腦片的電生理記錄領域，公開了一種小鼠腦片神經元復蘇液、制備方法及其應用，本發明提供的小鼠腦片神經元復蘇液組分包括N?甲基?D?葡萄糖胺、氯化鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、碳酸氫鈉、氯化鈣和D?葡萄糖，本發明通過調節D?葡萄糖的濃度來調節腦片神經元復蘇液的滲透壓為300～310mOsm/L，并使用鹽酸調節pH為7.3～7.4。本發明腦片神經元復蘇液在用于離體腦片的神經元復蘇過程中，能促進受損神經元胞體及神經元樹突和軸突的自我修復，進而大幅提高腦片神經元的存活率。

技術領域

本發明涉及離體腦片的電生理記錄技術領域，尤其涉及一種小鼠腦片神經元復蘇液、制備方法及其應用。

背景技術

長期以來，制備出神經元成活率高的腦片一直是廣大離體腦片神經電生理記錄者的困擾，除了實驗技術難以掌握之外，有一個重要的因素就是不能制備出成活率高的神經元的腦片。神經元成活率高的腦片代表著所記錄的神經元損傷小，更接近在體狀態；而損傷小的腦片預示著更長的記錄時間。要得到成活率高的腦片，就需要有更適宜的將使用震動切片機制備的腦片中的神經元進行復蘇的培養液。然而到目前為止，仍未有成活率高的腦片神經元復蘇液的制備方法，研究者只能被動的在一片片腦片中尋找存活的神經元進行記錄，嚴重影響了他們的工作效率進而影響到實驗結果的可靠性。因此，尋找更適合腦片中神經元復蘇的腦片神經元復蘇液顯得迫在眉睫。

發明內容

本發明的目的是提供一種小鼠腦片神經元復蘇液、制備方法及其應用，本發明小鼠腦片神經元復蘇液能促進受損神經元細胞及神經元樹突和軸突的自我修復，大幅提高腦片神經元的存活率。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種小鼠腦片神經元復蘇液，該小鼠腦片神經元復蘇液的pH保持為7.3～7.4，其包含N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、碳酸氫鈉、氯化鈣和D-葡萄糖，其中，N-甲基-D-葡萄糖胺的濃度為90～100mM，氯化鉀的濃度為2～2.5mM，磷酸二氫鈉的濃度為1～1.5mM，硫酸鎂的濃度為1.25～1.5mM，碳酸氫鈉的濃度為25～30mM，氯化鈣的濃度為2～2.5mM，D-葡萄糖的濃度使得所述小鼠腦片神經元復蘇液的滲透壓為300～310mOsm/L。

在一個實施方式中，所述N-甲基-D-葡萄糖胺的濃度優選為90mM。

在一個實施方式中，所述氯化鉀的濃度優選為2.5mM。

在一個實施方式中，所述磷酸二氫鈉的濃度優選為1.25mM。

在一個實施方式中，所述硫酸鎂的濃度優選為1.25mM。

在一個實施方式中，所述碳酸氫鈉的濃度優選為25mM。

在一個實施方式中，所述氯化鈣的濃度為2.5mM。

本發明還提供了上述小鼠腦片神經元復蘇液的制備方法，所述制備方法包括：

1)稱量N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、碳酸氫鈉和氯化鈣，加水溶解，配置混合溶液；

2)向步驟1)得到混合溶液中加入作為滲透壓調節劑的D-葡萄糖，攪拌溶解；

3)向步驟2)得到的溶液中加入鹽酸調節pH至7.3～7.4，得到小鼠腦片神經元復蘇液。

本發明還提供了上述小鼠腦片神經元復蘇液或上述制備方法制備得到的小鼠腦片神經元復蘇液在離體腦片制備中用于使小鼠腦片神經元復蘇的用途。

與現有技術相比，本發明小鼠的組分包括N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、碳酸氫鈉、氯化鈣和D-葡萄糖，本發明通過調節D-葡萄糖的濃度來調節腦片神經元復蘇液的滲透壓為300～310mOsm/L，并使用鹽酸調節pH為7.3～7.4。本發明提供的小鼠腦片神經元復蘇液在用于離體腦片的神經元復蘇過程中，能促進受損神經元胞體及神經元樹突和軸突的自我修復，進而大幅提高腦片神經元的存活率。