[發明專利]可用于九色熒光STR分型的熒光染料、特異性擴增引物對和分型方法

有效

• 申請號: 202010075572.1
• 申請日: 2020-01-22
• 公開（公告）號: CN111286320B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 白雪;葉健;張濤;宋文
• 申請（專利權）人: 公安部物證鑒定中心
• 主分類號: C12Q1/6876
• 分類號: C12Q1/6876;C09K11/06
• 代理公司: 北京冠榆知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

本發明公開可用于九色熒光STR分型的熒光染料、特異性擴增引物對和分型方法，包括9種熒光染料，分別為FAM、TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635、ET650和ET680；8個熒光染料FAM、TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635和ET650對41個常染色體STR基因座和1個性別決定基因座Amel的擴增引物進行熒光標記；ET680用于標記內標。本發明的分型方法靈敏度高、結果穩定、圖譜完整清晰，重復檢測結果無明顯差異；stutter峰面積比不超過10％，峰高比不超過15％，具有良好的系統重復性，42個基因座復合擴增體系檢測均能得到準確分型結果。

技術領域

本發明涉及熒光STR分型技術領域。具體地說是可用于九色熒光STR分 型的熒光染料、特異性擴增引物對和分型方法。

背景技術

目前，市售DNA檢驗試劑盒最多為六色熒光，如申請人的在先研究如中 國專利文獻CN107254516，對24個常染色基因座和1個性別決定基因座在 內的共計25個基因座進行熒光STR分型。

最先進的DNA檢驗試劑，常染色體最多能同時擴增檢測27個基因座， Y染色體可達到38個，受限于可用熒光染料種類和引物設計等因素，限制 了試劑盒基因座的檢測數量。對于微量降解檢材、復雜親緣關系鑒定還需要 加做試劑盒檢驗。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種可用于九色熒光STR分 型的熒光染料、特異性擴增引物對和熒光STR分型方法，打破現有檢測系統 熒光數量和基因座數目的限制，通過一次擴增可以獲得41個常染色體基因 座的分型信息，可有效的提高系統檢測效能。

為解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：

可用于九色熒光STR分型的熒光染料，包括9種熒光染料，分別為FAM、 TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635、ET650和ET680；其中，8個熒光染 料FAM、TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635和ET650對41個常染色體STR基因座和1個性別決定基因座Amel的擴增引物進行熒光標記；ET680用 于標記內標。

可用于九色熒光STR分型的特異性擴增引物對，包括42個基因座對應的 特異性擴增引物對，其序列分別為序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.84的 核苷酸序列。

九色熒光STR分型方法，包括如下步驟：

(1)熒光體系的構建：采用8種不同的熒光染料標記42個基因座 的擴增引物，并采用ET680用于標記內標；

(2)復合擴增體系的構建：使用與42個基因座對應的特異性擴增 熒光引物序列對42個基因座進行擴增，獲得擴增產物；

(3)對PCR擴增產物進行STR基因座分型。

本發明的技術方案取得了如下有益的技術效果：

首次提出了九色熒光復合擴增技術，目前尚無相關文獻及專利。本發明 可一次同時擴增檢測42個基因座，為同類產品中包含常染色體基因座數量 最多的試劑盒。