[發明專利]順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的生物學制備方法

在審

• 申請號: 202010074917.1
• 申請日: 2013-06-12
• 公開（公告）號: CN111485008A
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 藤井匡;田村圭輔
• 申請（專利權）人: 日本邁科洛生物制藥有限公司
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;C12N15/53;C12N1/21;C12N9/02;C12R1/19
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 魯煒;楊戩

1.順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸或其藥學上可接受的鹽或者它們的溶劑合物的制備方法，其包含，通過以可表達的狀態含有下述(A)和(D)～(F)、以及(G)和(H)中任一多核苷酸的微生物，以L-六氫吡啶甲酸為底物生成順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的步驟：

(A)由序列號2記載的堿基序列組成的多核苷酸；

(D)編碼由序列號25記載的氨基酸序列組成的蛋白質的多核苷酸；

(E)編碼由在序列號25記載的氨基酸序列中置換、缺失、插入、和/或添加1個氨基酸而成的氨基酸序列組成、并且具有催化以L-六氫吡啶甲酸為底物生成順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸；

(F) 編碼由與序列號25記載的氨基酸序列具有至少99.7％以上同一性的氨基酸序列組成、并且具有催化以L-六氫吡啶甲酸為底物生成順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸；

(G) 編碼由在序列號25記載的氨基酸序列中置換、缺失、插入、和/或添加1個氨基酸而成的氨基酸序列組成、并且具有催化以L-六氫吡啶甲酸為底物生成順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸，并且該多核苷酸來源于裙皺慢反應脂肪酸菌(Segniliparus rugosus)和

(H) 編碼由與序列號25記載的氨基酸序列具有至少99.7％以上同一性的氨基酸序列組成、并且具有催化以L-六氫吡啶甲酸為底物生成順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸，并且該多核苷酸來源于裙皺慢反應脂肪酸菌(Segniliparusrugosus)。

2.權利要求1中記載的制備方法，其中所述微生物以可表達的狀態進一步含有：編碼具有催化以L-賴氨酸為底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反應的活性的蛋白質的多核苷酸、以及編碼具有催化以Δ1-哌啶烯-6-甲酸為底物生成L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸，所述方法進一步包含：

以L-賴氨酸為底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛、隨后將L-氨基己二酸-Δ-半醛轉化為Δ1-哌啶烯-6-甲酸的步驟；以及

以Δ1-哌啶烯-6-甲酸為底物生成L-六氫吡啶甲酸的步驟。

3.權利要求2中記載的制備方法，其中所述編碼具有催化以L-賴氨酸為底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反應的活性的蛋白質的多核苷酸來源于泥色黃桿菌(Flavobacteriumlutescens)。

4.權利要求2或3中記載的制備方法，其中所述微生物是大腸桿菌，其原本具有編碼具有催化以Δ1-哌啶烯-6-甲酸為底物生成L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸。

5.下述(D)的多核苷酸：

(D)編碼由序列號25或序列編號26記載的氨基酸序列組成的蛋白質的多核苷酸。

6.轉化用載體，其包含權利要求5中記載的多核苷酸。

7.權利要求6中記載的微生物的轉化用載體，其進一步包含編碼具有催化以L-賴氨酸為底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反應的活性的蛋白質的多核苷酸。

8.權利要求6或7中記載的微生物的轉化用載體，其進一步包含編碼具有催化生成α-酮戊二酸的反應的活性的蛋白質和/或具有催化以Δ1-哌啶烯-6-甲酸為底物生成L-六氫吡啶甲酸的反應的活性的蛋白質的多核苷酸。

9.基因重組微生物，其通過權利要求6～8的任一項中記載的載體轉化。

10.基因重組大腸桿菌，其通過權利要求5中記載的多核苷酸、以及編碼具有催化以L-賴氨酸為底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反應的活性的蛋白質的多核苷酸轉化，且具有以L-賴氨酸為原料生成順式-5-羥基-L-六氫吡啶甲酸的能力。

11.下述(d)的蛋白質：

(d) 由序列號25或序列編號26記載的氨基酸序列組成的蛋白質。