[發明專利]一株可改善上呼吸道感染癥的鼠李糖乳桿菌Probio-M9及其應用

在審

• 申請號: 202010071244.4
• 申請日: 2020-01-21
• 公開（公告）號: CN111154693A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 張凌宇;張建軍;馬杰;郭霄;劉曉軍;姚國強;其木格蘇都
• 申請（專利權）人: 北京科拓恒通生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23C9/123;A23L33/135;A23K10/18;C12R1/225
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

本申請公開了一株可改善上呼吸道感染癥的鼠李糖乳桿菌Probio?M9及其應用。本申請以鼠李糖乳桿菌Probio?M9為研究對象，選擇志愿者91人，隨機分為益生菌組和安慰劑組進行為期6周的干預試驗，并每周對志愿者進行一次調查隨訪。實驗證明，鼠李糖乳桿菌Probio?M9可改善成人在流感高發季節上呼吸道感染的癥狀并縮短癥狀持續時間。

技術領域

本申請涉及生物技術領域，特別涉及一株可改善上呼吸道感染癥的鼠李糖乳桿菌Probio-M9及其應用。

背景技術

流感有季節性流行和流感大流行之分。季節性流感指的是每年冬春季節發生的流感，主要因流感病毒發生小的變異所致。流感大流行是指當流感病毒發生突變，人類對其缺乏免疫能力，從而引發全球范圍內流行。患流感的幾率在一定程度上取決于每個人免疫系統的強弱。

上呼吸道感染是常見病、多發病，是包括鼻腔、咽或喉部急性炎癥的總稱。廣義的上呼吸道感染不是一個疾病診斷，而是一組疾病，包括普通感冒、病毒性咽炎、喉炎、皰疹性咽峽炎等；狹義的上感又稱普通感冒，是最常見的急性呼吸道感染性疾病，多呈自限性，但發生率較高，其發病率歷年都高于其他病種。成人每年發生2-4次，兒童發生率更高，每年6-8次，全年皆可發病，冬春季較多。

目前，成人或兒童預防或治療上呼吸道感染通常采用注射或口服給藥的方式，但這些方式在預防和治療過程中會對病人造成給藥痛苦以及疼痛，尤其兒童因為害怕疼痛以及厭惡藥的味道對注射以及口服給藥的方式配合度很低，治療效果受到影響。因此，缺少一種高效、安全、無毒副作用的可改善成人流感季節上呼吸道感染癥狀的益生菌。

發明內容

本申請的目的之一在于提供一株可改善上呼吸道感染癥的鼠李糖乳桿菌Probio-M9。

本申請的目的之二在于提供鼠李糖乳桿菌Probio-M9在改善上呼吸道感染癥的應用。

進一步地，所述鼠李糖乳桿菌Probio-M9在發酵劑或添加的發酵乳、健康食品以及動物保健制品中的應用。

本申請的鼠李糖乳桿菌Probio-M9是通過以下技術方案實現的：

本申請所述鼠李糖乳桿菌Probio-M9是從中國內蒙古、新疆、湖北、北京等地區100份健康婦女母乳樣中分離得到的540株乳酸菌和雙歧桿菌中篩選出的一株具有潛在益生特性的益生菌。具體地，通過以下分離方法得到的：

步驟1：將采集到的100份健康婦女的母乳樣品進行倍比稀釋，得到10^-1-10^-2稀釋梯度，吸取各梯度母乳樣品200μL均勻涂布于MRS固體培養基平皿內，37℃厭氧培養48-72h；

所述MRS培養基的組成有大豆蛋白胨10g、牛肉膏5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、Tween80 1ml、磷酸二氫鈉2g、無水乙酸鈉5g、檸檬酸三胺2g、硫酸錳0.02g、硫酸鎂0.1g，蒸餾水1L，調節pH至6.2左右，瓊脂15g，121℃、15min滅菌。

步驟2：挑取形態、大小、顏色不同的單克隆接種于液體培養基中，于37℃恒溫培養箱培養24h；

步驟3：待菌株生長良好后，進行革蘭氏染色、鏡檢。保存分離株，并提取菌株基因組DNA用于后續測定分析；

步驟4：將冷凍保存的供試菌株接種于TPY增菌液體培養基中，于30℃恒溫培養24h，經TPY傳代培養2-3代后，取2mL對數生長末期的菌體培養物置于無菌EP管內離心，經8000×g離心3min(4℃)后收集菌體，棄上清；

所述TPY增菌培養液的組成有乳糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、酪蛋白胨10g、大豆蛋白胨5g、磷酸氫二鉀2.5g、磷酸二氫鉀2.5g、硫酸鎂0.1g、吐溫80 0.25g、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g、15g瓊脂、蒸餾水1L，121℃、15min滅菌。