[發明專利]一種特異性檢測藻毒素類物質的納米抗體及酶聯免疫分析方法

有效

• 申請號: 202010068524.X
• 申請日: 2020-01-21
• 公開（公告）號: CN111499737B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 王弘;司睿;雷紅濤;王鋒;張玉琪;張瑾如;徐振林;肖治理
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;G01N33/543
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發明公開了一種特異性檢測藻毒素類物質的納米抗體及酶聯免疫分析方法，所述納米抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本納米抗體可以識別多種含藻毒素(NOD、MC?LR、MC?YR、MC?WR和MC?RR)，且檢測結果準確、效果好、穩定性好、特異性好。該方法可以廣泛的應用于飲用水中藻毒素的殘留檢測，避免了利用單克隆抗體和多克隆抗體建立免疫檢測方法時候，目前單克隆抗體和多克隆抗體均表現穩定性差、易失活的缺點的不足，使酶聯免疫分析檢測法更具市場前景。本方法具有很大的應用推廣價值。

技術領域

本發明涉及藻毒素類物質的檢測技術領域，更具體地，涉及一種特異性檢測藻毒素類物質的納米抗體及酶聯免疫分析方法。

背景技術

隨著人們生活水平的提高和工農業活動的發展，水體富營養化現象日趨普遍，水華事件不斷涌現，有毒藻類及其引發的健康問題正日益引起人們的關注。且節球藻毒素(NOD)易溶于水，加熱煮沸也不能將毒性破壞，且自來水處理工藝的混凝沉淀、過濾、加氯、氧化、活性炭吸附等也不能將其完全去除。早在1878年，Nature首次報道了澳大利亞有毒藍藻泡沫節球藻水華事件，引發世界注目。

NOD的主要靶器官為肝臟和腎臟。Tetsuya Ohta等就NOD對F344雄性鼠的肝臟毒性進行了研究，發現NOD對小鼠肝的致癌效應與二乙基亞硝胺單獨作用時相類似，揭示了NOD是一種致癌物質。NOD對動物還具有急性毒性作用。2002年，Rheal A.Towner利用磁共振技術對大鼠體內NOD的毒性進行評估，結果顯示，腹腔注射3h后肝組織中含有NOD的區域有明顯損傷,并且同時發現肝血清功能酶(轉氨酶和天冬氨酸轉氨酶)的活性也受到一定的抑制。雖然相關機構還未對NOD的限量進行規定，但隨著對其毒性的深入研究，以及日益嚴重的水體富營養化的大環境，NOD必將受到越來越多的重視。

傳統的節球藻毒素檢測方法有高效液相色譜法、薄層層析法、酶聯免疫分析(ELISA)法以及蛋白磷酸酶抑制分析(PPIA)法等。近年來也涌現出一些新型檢測方法，如放射性標記法、單克隆抗體法等。儀器法雖然準確性高，但以其價格昂貴，檢測成本高，且不便于移動，無法做到現場檢測。基于抗體建立免疫分析方法，具有快速、靈敏、簡便，低成本等優點，但是如今市場上所用到的單克隆抗體和多克隆抗體均表現穩定性差、易失活的缺點。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術單克隆抗體和多克隆抗體均表現穩定性差、易失活的缺點的不足，提供一種特異性檢測藻毒素類物質的納米抗體及酶聯免疫分析方法。

本發明的第一個目的是提供一種抗節球藻毒素的納米抗體。

本發明的第二個目的是提供一種抗節球藻毒素的納米抗體的編碼基因。

本發明的第三個目的是提供一種重組載體。

本發明的第四個目的是提供一種重組細胞。

本發明的第五個目的是提供所述納米抗體、所述編碼基因、所述重組載體或所述重組細胞在檢測藻毒素類物質中的應用，或制備檢測藻毒素類物質的免疫試劑盒的應用。

本發明的第六個目的是提供一種酶聯免疫分析檢測藻毒素類物質的方法。

本發明的第七個目的是提供一種間接競爭酶聯免疫檢測藻毒素的試劑盒。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：

本發明首先構建了雙峰駝來源的噬菌體展示納米抗體文庫，并從噬菌體展示納米抗體文庫中篩選到一種針對藻毒素類天然生物毒素的納米抗體，該納米抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，編碼該納米抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

因此本發明要求保護一種抗藻毒素的納米抗體，所述納米抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

一種抗節球藻毒素的納米抗體的編碼基因，所述納米抗體的核苷酸序列如SEQ IDNO：2所示。