[發明專利]一種粒徑可控的熒光聚多巴胺納米粒子的制備以及胰蛋白酶的檢測

在審

• 申請號: 202010067821.2
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111208104A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 翁少煌;林新華;葉佳慧;李鳳蘭;王珍珍
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種粒徑可控的熒光聚多巴胺納米粒子的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將多巴胺（DA）和三羥甲基氨基甲烷（Tris）混合攪拌，自聚合成聚多巴胺納米顆粒（PDAnanoparticles），之后加入H₂O₂和NaOH加熱回流，將最終產物用截留分子量為3500 Da的透析袋透析便得到熒光聚多巴胺納米粒子（PDNPs）。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述三羥甲基氨基甲烷（Tris）加入HCl調節溶液pH 為8.5，攪拌20小時。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，加入H₂O₂和NaOH加熱回流30 min后制得PDNPs。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的PDNPs最大激發波長為340 nm，最大發射波長為435 nm。

5.如權利要求1-4任一所述的制備方法制得熒光聚多巴胺納米粒子（PDNPs）。

6.一種權利要求5所述的熒光聚多巴胺納米粒子檢測胰蛋白酶的檢測方法，通過熒光分光光度法對加入不同濃度胰蛋白酶前后PDNPs的熒光進行檢測，其特征在于，所述熒光分光光度法中使用的溶液由緩沖溶液、權利要求5所述的熒光聚多巴胺納米粒子（PDNPs）、魚精蛋白和胰蛋白酶混合而成。

7.如權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，在緩沖溶液、PDNPs、魚精蛋白和胰蛋白酶溶液中，魚精蛋白（Pro）濃度在10~80 μg/mL范圍內和PDNPs、魚精蛋白和胰蛋白酶的反應時間在0.1~20分鐘范圍內進行優化。

8.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，選擇最佳Pro濃度為40 μg/mL，最佳反應時間20 min。

9.如權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，緩沖溶液為PBS，緩沖溶液濃度為10 mM、pH為8.0，胰蛋白酶（TRY）、PDNPs和魚精蛋白溶液在混勻后于室溫下孵育10 min后，再進行熒光檢測。

10.如權利要求6-9任一所述的檢測方法，其特征在于，通過所述熒光分光光度法繪制的熒光光譜曲線方程為：Y=0.060+4.298X，R²=0.99203，Y為 (F-F₀)/F₀，F₀和F分別為加入胰蛋白酶前后PDNPs-Pro的熒光值；X為胰蛋白酶濃度，最低檢測限(LOD)= 6.4 ng/mL；所述溶液中各組分的含量為：PDNPs的濃度為0.15 μg/mL，Pro的濃度為40 μg/mL。