[發明專利]一種檢測血清肺炎支原體特異性IgE的試劑盒

在審

• 申請號: 202010066778.8
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111122861A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 葉青;毛建華;田丹丹
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明公開了一種檢測血清肺炎支原體特異性IgE的試劑盒。所述試劑盒由包被抗原、固相載體、陽性質控品、陰性質控品、酶標記抗人IgE抗體、抗原稀釋液、樣品稀釋緩沖液、檢測抗體稀釋緩沖液、洗滌液，顯色液、終止液組成。本發明所屬試劑盒具有靈敏度高，特異性強，檢測成本低，樣品用量少，操作簡便，實驗和結果判斷不需要特殊儀器設備等優點，為臨床提供一種檢測肺炎支原體IgE的檢測試劑盒，并探討其在肺炎支原體肺炎合并的哮喘診斷中的應用。

技術領域

本發明涉及體外診斷免疫檢測領域，具體地涉及一種檢測血清肺炎支原體特異性IgE 的試劑盒，是一種快速簡便地定性和半定量分析伴有肺炎支原體肺炎患兒血清中特異性IgE 水平的檢測試劑盒和制備方法。

技術背景

哮喘是最常見的慢性非傳染性疾病之一，世界衛生組織2014年全球哮喘報告估計，目前全世界有3.34億人患有哮喘。全球明確診斷的哮喘患病率約為4.3％(95％CI 4.2-4.4)，給家庭和社會帶來了沉重的負擔。近年許多研究成果表明,肺炎支原體(MP)感染與哮喘的發生密切相關,且與哮喘的發展及惡化皆有密切的關系。我們都知道兒童是肺炎支原體最為易感的群體之一，中國臺灣學者基于島內醫療保險的大數據分析，得出結論兒童時期有肺炎支原體感染史的人群與未發生過肺炎支原體感染的人群相比，其后患哮喘的校正危險比為3.35(95％ CI,2.71-4.15)。為了評估兩者之間的關系，我們進行了一些前瞻性的研究，發現151例2-16 歲首次哮喘發作的患兒中急性MP感染78例(52％)，206例既往診斷哮喘并急性發作的患兒中急性MP感染43例(21％)，而穩定期哮喘和健康人群肺炎支原體感染率僅為5％和4％，見圖1A。由此可見，肺炎支原體感染與哮喘的發生和發作存在一定的聯系。在另一項前瞻性研究中，我們發現在118例攜帶MP的哮喘患兒中77例哮喘反復發作，發生率為65％，而相對的108例無MP攜帶的哮喘患兒中僅有17例哮喘反復發作，發生率僅為16％，見圖1B。由此推測，MP慢性感染可能是哮喘患兒反復發作的原因之一。

肺炎支原體導致哮喘的病理生理機制尚不完全清楚。現有的研究認為肺炎支原體感染引起的I型超敏反應在哮喘的發生中起作用。我們前期的實驗研究表明肺炎支原體感染會造成感染者體內Th1/Th2細胞發生失衡，使得Th0細胞向Th2細胞過度分化，引起B細胞發生抗體類別轉換，產生更多的IgE，從而介導哮喘的發生。另外，我們實驗結果表明許多MP肺炎(MPP)患者的血清總IgE水平升高，我們進一步證明了這部分患兒血清中升高的IgE 所對應的過敏原為肺炎支原體組分。具體實驗如下：將提取肺炎支原體菌體蛋白點在纖維素膜上，加入MP肺炎患者血清進行孵育、清洗后加抗IgE抗體的二抗，如血清中含有抗MP 的IgE抗體，則出現陽性條帶(圖2A)，如血清中不含有抗MP的IgE抗體，則不出現陽性條帶(圖2B)。結果發現，35％的MP肺炎患兒血清中有抗MP的IgE抗體。

基于以上基礎研究，我們建立了一種MP特異性IgE斑點酶免疫檢測試劑盒及其制備方法，為臨床上MPP合并哮喘早期診斷提供實驗室依據。

發明內容

本申請的目的是提供一種檢測血清肺炎支原體(MP)特異性IgE的試劑盒，主要包括包被抗原、固相載體、陽性質控品、陰性質控品、酶標記抗人IgE抗體、抗原稀釋液、樣品稀釋緩沖液、標記抗體稀釋緩沖液、洗滌液、底物顯色劑、終止液，信號檢測方法為光顯色法。

所述包被抗原為肺炎支原體菌體總蛋白。通過培養肺炎支原體并提取定量菌體蛋白作為抗原蛋白。

所述陽性質控品為肺炎支原體特異性IgE濃度較高的MPP患者的混合血清并定量作為陽性質控品，所述陰性質控品為正常人血清或胎牛血清。

所述酶標記抗人IgE抗體為辣根過氧化物酶標記羊抗人IgE。

所述包被抗原(肺炎支原體菌體總蛋白)固定于固相載體上，優選的固相載體包括：硝酸纖維素膜。