[發明專利]檢測華南虎或蜱蟲內血液原蟲的通用引物

在審

• 申請號: 202010065695.7
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN110951903A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 邱泓銓;黃翠琴;孫曉雙;李世賢
• 申請（專利權）人: 龍巖學院
• 主分類號: C12Q1/6893
• 分類號: C12Q1/6893;C12Q1/6848;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.檢測華南虎或蜱蟲內血液原蟲Colpodella的通用引物，其特征在于：包括設計的兩組引物，具體如下：

第一組引物:

Colp-F1: 5’- GCTGGCACGACAGGTTTCCC-3’；

Colp-R1: 5’-CCGCACAGATGCGTAAGGAG -3’；

第二組引物:

Colp-F2: 5’-GCTTGCATGCCTGCAGGTCGAC-3’；

Colp-R2: 5’-GGTACCCGGGGATCCTCTAGAG-3’。

2.一種采用權利要求1所述的檢測華南虎或蜱蟲內血液原蟲Colpodella的通用引物的巢式PCR鑒定方法，其特征在于：其包括以下步驟：

1）以華南虎血液樣品或蜱蟲樣品基因組DNA為模板，以權利要求1中所述的Colp-F1和Colp-R1為第一輪引物，進行第一輪PCR；

2)以第一輪PCR產物DNA為模板，以權利要求1中所述的Colp-F2和Colp-R2為第二輪引物，進行第二輪PCR；

3)取第二輪PCR產物進行1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定；

4)將第二輪PCR產物進行序列測定；

5)根據NCBI數據庫中記載的血液原蟲Colpodella基因序列，進行系統進化分析，最終得出樣品鑒定結果。

3.根據權利要求2所述的巢式PCR鑒定方法，其特征在于：所述第一輪PCR的反應條件為：

94℃預變性5 min；

94℃變性1 min，56℃退火1 min，72℃延伸30s，進行35個循環；

最后72℃延伸10 min。

4.根據權利要求2所述的巢式PCR鑒定方法，其特征在于：所述第二輪PCR的反應條件為：

94℃預變性5 min；

94℃變性1 min，56℃退火45s，72℃延伸1min，進行35個循環；

最后72℃延伸10 min。